ZFNs 동물 모델

협상 가능업데이트03/04

모델

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개요

ZFNs 동물 모델: 아연지핵산효소(ZFNs) 동물 모델은 아연지핵산효소 유전자 편집 기술을 이용해 구축한 실험동물 모델이다.아연지핵산효소는 아연지단백질 (ZFP) 과 핵산효소 (FokI) 가 융합되여 형성된것으로서 아연지단백질은 특이적으로 목표DNA서렬과 결합할수 있으며 핵산효소는 DNA를 절단하여 특정유전자위치에 이중사슬단렬을 도입하고 세포의 복구메커니즘을 유도하여 유전자의 제거, 두드리기 또는 돌연변이를 실현할수 있다.

제품 정보

하나,ZFNs 동물 모델기술 원리와 핵심 메커니즘

ZFNs 예1세대 프로그래밍 가능한 유전자 편집 도구, 융합을 통해DNA 결합 도메인(아연지단백질) 및DNA 절단 도메인(FokI 핵산 효소) 표적 편집 실현:

아연 지단백질 구조역：

부터아미노산 중복 단위 30-34개구성, 각 유닛 통과12, 13비트 가변 잔기(RVDs)특정 염기 식별:

RVD 유형	염기 를 식별 하다	특이성
NI는	A	높은
NG는	T	높은
HD	C	높은
NN	G/A	중간

단일 아연 손가락 인식3개의 bp, 3-6 개의 표적 가능 방향 연결9-18 기본시퀀스.

FokI 가공 도메인：

필요이중화절단 기능을 활성화할 수 있습니다 → ZFNs는 쌍으로 설계되어야 합니다 (왼쪽 팔/오른쪽 팔). 절단 위치는 두 팔의 결합 위치 사이 (간격 5-7 bp) 에 있습니다.

편집 메커니즘：

이중 체인 파열(DSB) → 세포 부팅 복구 경로:

비동원 끝 연결(NHEJ): 임의의 삽입/누락(Indels)으로 인해 유전자가 제거됩니다.
동일 소스 방향 조정(HDR): 점 돌연변이 또는 유전자 삽입을 위해 ssODN과 같은 외부 소스 복구 템플릿이 필요합니다.

기술적 돌파: shou 보조 구현포유동물 게놈 표적 편집(2005년), 정확한 유전자 편집 시대를 열었다.

2.ZFNs 동물 모델프로세스 및 기술 최적화

(1) 표준화 작업 절차

(2) 핵심 기술 매개변수 최적화

단계	핵심 운영	혁신 최적화
표적 설계	고반복/메틸화 영역 피하기, 간격 5-7bp	결합 효율성 향상을 위한 소프트웨어 예측(ZiFiT)
아연 손가락 조립	모듈식 직렬 연결법：

3-6개의 아연 손가락 유닛 직렬
Golden Gate 클론(BsaI/BsmBI) - 6일 구축 완료, 성공률 > 80%
|표현 캐리어mRNA 합성 및 단백질 발현을 지원하는 이중 시동 하위 캐리어 (CMV/T7)
|배달 방법- 수정란 현미경 주사 ZFNs mRNA
체세포 전염 + 핵 이식 (대형 동물) & mRNA 배달 감소 탈표적
|개선 사항 수정▲ 통합 ssODN 템플릿 + NHEJ 억제제(SCR7) ▲ HDR 효율성 3배 향상 ▲

3. 다종 응용 사례와 모델의 장점

(1) 전형적인 종과 질병 모델

종	표적 유전자	질병 모델	효율성 / 폼 팩터	연구 가치
제브라피시	황금	백화병	95% F0 세대 색소 결핍	발육 유전자 기능 선별
생쥐	Rag2/IL2rg는	면역 결함 모델	이중 유전자 제거, 인간화 이식 플랫폼	종양 면yi 치료 연구
돼지	GGTA1은	이종기 guan 이식 모델	알파-Gal 항원 제거, 초급성 배척 감소	인원화 기관 개발
초파리	노란색	체색이 돌변하다.	생식계 돌연변이율 5.7%(동물모델)	유전자 기능 보수성 검증

(2) 대체불가능한 응용장면

높음 GC 영역 편집：

PAM 시퀀스 제한 없이 CRISPR/Cas9에서 편집할 수 없는 영역을 표적으로 설정할 수 있습니다.

낮은 탈과녁률 수요：

치료적 편집 중 과녁 이탈률은 <0.1%(CRISPR은 1~10%)이다.

대형 동물 모형：

돼지, 소 등은 크리스퍼보다 면역원성이 낮다.

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