생쥐 간염 바이러스 탐지기 형광 정량 RT-PCR 시약함 세포주류

【제품명】쥐 간염 바이러스 탐지기 형광 정량 RT-PCR 키트

이름：마우스간염바이러스(MHV)프로베그RT-PCRKit

【포장규격】50회/박스

【예상 용도]쥐 간염 바이러스(MouseHepatitisVirus, MHV) 는 혈액과 내장, 특히 간과 신장에 존재하는 RNA 바이러스로, 분뇨에서도 볼 수 있으며, 어린 쥐에 대한 전염성이 높으며, 쥐 간염은 MHV로 인한 1종의 전염병으로, 독을 가진 쥐는 분포되어 있지만, 정상적인 상황에서는 대부분 불현성 감염을 나타내며, 스트레스 요인에 의해서만 이 간염을 검역하고 예방하는 데 중요한 질병으로 되어 있다. 따라서 이 간염을 예방하고 간염을 예방한다.이 제품은 바로 탐침법형광정량RT-PCR 기술을 기초로 개발된 생쥐간염바이러스를 전문적으로 검사하는 시약함으로서 다음과 같은 특징을 갖고있다.

1.즉시 사용 가능,사용자는 샘플 RNA 템플릿만 제공하면 됩니다.

2.유인물과 탐침은 최적화되어 민감성이 높다.

3.양성대조를 제공하여 가짜음성견본을 쉽게 구분할수 있다.

4.특이성이 높다.유인물은 생쥐 간염 바이러스의 고도 보수 구역에 따라 설계되어 다른 바이러스의 RNA와 교차 반응을 일으키지 않는다.

5.본 제품은 20μL 체계의 탐침 법형광 정량 RT-PCR 반응을 50회 충분히 할 수 있습니다.

6. 본 제품은 과학 연구에만 사용할 수 있습니다.

【규격 및 성분】

【운송 및 보존】저온 운송,-20 ℃ 보존, 보존 기간은 12 개월입니다.

【자체 시약】샘플 RNA.

생쥐 간염 바이러스 탐지기 형광 정량 RT-PCR 시약함【사용방법】1. 표준곡선견본을 희석한다 (10E2-10E6 카피/μL 이 6개의 10배 희석도의 경우) 표준품 농도가 매우 높기 때문에 아래 희석 작업은 반드시 독립된 구역에서 진행해야 하며 시료나 본 시약함의 기타 성분을 오염시켜서는 안 된다.제품의 안정성을 높이고 전염성 병원의 확산을 피하기 위해 본 제품은 생체 샘플을 양성 대조로 제공하지 않으며, 전염성이 없는 DNA 조각만 양성 대조로 제공한다.

1. 6개의 원심관을 표시하고 각각 6, 5, 4, 3, 2, 1.

2.벨트 코어 헤드로 각각 45 μL 형광 PCR 전용 템플릿 희석액 (벨트 코어 헤드를 사용하는 것이 좋습니다, 이하 같음).

3. 6번 튜브에 5μL1 × 10E7 카피/μL의 양성 대조(시약함 제공)를 넣어 1분간 충분히 흔들어 1 × 10E6 카피/μL의 표준 곡선 샘플을 얻는다.얼음 위에 올려 놓고 기다리다.

4. 총머리를 바꾸고 5번 튜브에 5μL1 × 10E6 카피/μL의 양성 대조(이전 단계에서 희석하여 얻은 것)를 첨가하여 1분 동안 충분히 진동하여 1 × 10E5 카피/μL의 표준 곡선 샘플을 얻는다.얼음 위에 올려 놓고 기다리다.

5. 총머리를 바꾸고 4번 튜브에 5μL1 × 10E5 카피/μL의 양성 대조(위 단계에서 희석하여 얻은 것)를 넣어 1분간 충분히 흔들어 1 × 10E4 카피/μL의 표준 곡선 샘플을 얻는다.얼음 위에 올려 놓고 기다리다.

6. 위의 작업을 반복하여 6개의 희석도의 표준 곡선 샘플을 얻을 때까지 한다.얼음에 넣어 쓰다.

2. 견본 RNA는의 제조

칠.N개의 샘플이 있다면 N+2개의 추출을 설정하는 것이 좋다. 하나 더 나온 것은 PC(샘플 제조 양성 대조), 하나 더 나온 것은 NC(샘플 제조 음성 대조)이다.10μL의 양성대조가 가능한 10000배의 희석액에 일정량의 물을 더하여 총체적을 매번 제조에 요구되는 체적과 같게 하여 PC로 삼을수 있다.또 물을 NC로 쓴다.

팔.자체 선택 방법으로 샘플의 RNA를 순화하여, 본 시약함은 시장의 대부분의 바이러스 RNA 추출 시약함과 호환된다。

삼ProbeqRT-PCR 반응(20μL 체계, 샘플 제조실에서 진행)

구.정량 분석을 하고 1회 반복만 하면 N + 9개의 PCR 튜브를 표시하는데, 그 중 N + 2개는 이전 단계에서 얻은 N + 2개의 샘플, 1개는 PCR 음성 대조 (물로 템플릿), 6개는 표준 곡선에 사용된다.정성 분석을 하고 1회 반복만 하면 N + 4개의 PCR 튜브를 표시하는데, 그 중 N + 2개는 이전 단계에서 얻은 N + 2개의 샘플, 1개는 PCR 음성 대조 (물로 템플릿), 1개는 PCR 양성 대조 (4번 튜브의 양성 대조 희석액으로 템플릿) 이다.다음은 정량 분석만을 작업 단계로 설명합니다.

십.표식관에 표를 눌러 각 성분을 첨가한다(이 표는 한 번만 반복적으로 나열한다. 검체관과 음성대조 설정이 완료된 후에야 양성대조를 설정한다. 또한 양성대조 검체는 모든 관이 뚜껑을 닫고 저장된 후 마지막에 추가한다)

11.뚜껑을 닫은 후 비행기에 올라 아래 파라미터에 따라 진행하다qRT-PCR:

4: 데이터 처리

12.이 시약함을 정량검사에 사용한다면 양성대조농도의 log값을 가로축으로 하고 Ct값을 세로축으로 하여 표준곡선을 그린다.다시 시료의 Ct 값을 측정하여 표준 곡선에서 시료의 RNA 농도의 log 값을 추산한 다음 그 농도를 추산한다.

십삼.만약 본 시약함을 정성검사에 사용하고 양성이나 음성만 판단한다면 음성대조Ct는 반드시 40보다 크거나 같아야 한다.양성 대조는 반드시 형광 대수 증가가 있어야 하고, 전형적인 증폭 곡선이 있어야 하며, Ct 값은 30보다 작거나 같아야 한다.검체의 경우 Ct가 40보다 크거나 같으면 음성, 35보다 작거나 같으면 양성이다.35-40이면 한 번 반복합니다.반복 실험의 Ct 값은 40보다 크거나 같으면 음성, 35보다 작으면 양성이다.