사람의 난소는 섬유세포가 된다

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사람의 난소는 섬유질이 되어 난소 조직에서 분리된다.난소는 암컷 동물의 생식기관으로 난소의 기능은 난과 스테로이드 호르몬을 생성하는 것이다.난소의 위치는 고환과 같으며 좌측발육 (우측은 이미 퇴화) 만 있고 포도모양을 띠고있으며 모두 부동한 발육시기에 처해있는 난포로서 난포는 노란색을 띠고있으며 난소표면에는 혈관이 빽빽이 분포되여있다.난소의 크기는 나이와 산란기와 관계가 있다.대부분의 척추동물은 두 개의 난소를 가지고 있지만, 일부 어류의 두 난소는 단일 구조로 융합되어 있으며, 모든 조류는 왼쪽 난소만 기능이 있다.난소는 자궁 양쪽에 위치한 한 쌍의 난원형의 생식기관으로서 그의 겉면에는 상피조직이 있고 그 아래에는 얇은 결단조직이 있다.난소의 내부 구조는 피질과 수질로 나눌 수 있다.피질은 난소의 주변 부분에 위치하며 주로 난포와 결단조직으로 구성된다.수질은 중앙에 위치하며 푸석푸석한 결단조직으로 구성되는데 그중에는 많은 혈관, 림프관과 신경이 있다.성섬유세포(Fibroblast)는 푸석푸석한 결체조직의 주요 세포 성분으로 배아 시기의 간충질 세포에서 분화된 것이다.성섬유세포는 비교적 크고 윤곽이 뚜렷하며 대부분 돌출된 방추형이나 성형의 편평상구조로서 그 세포핵은 규칙적인 란원형을 띠고있으며 핵인은 크고 뚜렷하다.성섬유세포의 기능활동이 왕성하고 세포질이 약한 알칼리성을 좋아하며 뚜렷한 단백질합성과 분비활동을 갖고있어 일정한 조건하에서 섬유세포와의 상호전환을 실현할수 있다.성섬유세포는 정도에 따라 세포의 변성, 괴사, 조직 결손을 복구하는 데 매우 중요한 역할을 한다.방금 분리된 난소성 섬유세포는 원형이고 굴절성이 양호하여 배지에 떠 있다.30min 세포가 벽에 붙으면 그 중 일부가 위족을 내밀기 시작하여 작은 돌기로 나타난다;6h후 세포는 기본적으로 벽에 붙어wan전이고 북모양으로 뻗어있으며 포핵이 뚜렷하고 분포가 비교적 균일하며 생장하고 뭉치지 않는다.세포의 생장이 신속하여 5~7일이면 융합상태를 보이고 세포의 배열이 긴밀하며 어떤 것은 교차중첩생장하고 평탄하고 포체가 비교적 크며 세포질이 투명하고 세포핵이 비교적 크며 타원형이고 색깔이 옅다.세포가 융합되어 서로 그물 모양으로 연결된다;세포는 돌출된 방추형이나 성형의 편평한 분포를 보인다.난소성섬유세포는 대부분 난소표면에 분포되여있는데 그 주요특징과 기능: ①성섬유세포는 체외에서 쉽게 배양할수 있다.② 난소가 손상되면 성섬유세포가 난소를 복구하고 재창조할 수 있다.③ 난소 염증 시 염증 확산을 효과적으로 억제한다.
방법 소개:

회사 실험실에서 분리된 사람 난소성 섬유 채택yi 단백질 효소-콜라겐 효소 혼합 소화법 결합 차속 밀착 법제 준비, 세포 총량은 약 5 × 10?cells/병.
품질 검사:

회사 실험실에서 분리된 사람 난소성 섬유경Vimentin은 면역형광감정으로 순도가 90% 이상에 달하며 HIV-1, HBV, HCV, 지원체, 세균, 효모와 진균 등을 함유하지 않는다.

배양기 함FBS、성장첨가제, 페니실린, 스트립토마이신 등

환액 주파수 매2-3일에 한 번씩 환액

성장 특성 벽에 붙이다

세포 형태 섬유세포 모양으로 되다

세대 간 특성 전달 가능5대 정도;3대 이내 상태

소화액 0.25% yi 프로테아제

배양 조건 기상: 공기,95%；CO2, 5%

준비 작업

1.실험기자재 준비: 무균의 배양접시, 배양병, 이액관, 원심관, 수술기구 등을 준비하고 고압멸균 또는 기타 적합한 소독처리를 한다.

2.시약 준비: 적합한 배양기, 소화효소 (예: 콜라겐효소 등), 태우혈청, 쌍항 등 시약을 조제 또는 구매하여 무균하고 유효기간 내에 확보한다.

3.실험동물 또는 조직원천준비: 실험수요에 따라 적합한 동물을 선택하고 상응한 마취 또는 처형을 진행하여 필요한 조직을 획득한다.또는 기존 조직 샘플 라이브러리에서 조직을 가져옵니다.

취재와 처리

1.취재: 무균조건하에서 목표조직을 신속히 제거하여 조직에 대한 손상을 최소화하고 불필요한 지방, 결단조직 등 비목적조직을 제거한다.

2. 세척: 추출한 조직을 미리 차가운 무균 PBS로 수차례 씻어 혈액과 불순물을 제거한다.

3. 잘라내기: 후속 소화를 위해 조직을 약 1-2mm³의 작은 조각으로 잘라냅니다.

세포 분리

1. 소화: 잘게 자른 조직 덩어리를 적당량의 소화효소가 함유된 원심관에 넣고 37 ℃ 의 항온 흔들침대나 배양상자에서 일정 기간 소화한다.그 동안 원심관을 가볍게 흔들어 소화를 균일하게 한다.

2.소화 중지: 조직 덩어리가 대부분 단세포 현액 또는 소세포 덩어리로 소화될 때 혈청을 함유한 배지를 넣어 소화를 중지한다.

3. 여과와 원심: 세포체로 세포현액을 여과하여 소화되지 않은 조직파편을 제거한후 여과액을 적당한 회전속도로 원심분리하여 세포침전을 수집한다.

세포 관찰 및 검사

1.일상 관찰: 매일 거꾸로 현미경으로 세포의 형태, 생장 상태, 밀도 등을 관찰하고 세포의 변화 상황을 기록한다. 예를 들어 세포 오염이나 이상이 발견되면 즉시 상응하는 조치를 취한다.
2.세포 계수 및 활력 검사: 필요할 때 대망람 염색 등 방법으로 세포에 대해 계수와 활력 검사를 진행하여 세포의 생장 상황과 건강 상태를 파악할 수 있다.

1. 취재와 분리

1. 빠른 조작

- 조직 취재 후 즉시 처리하여 실온이나 비영양 환경에 장시간 노출되지 않도록 한다.

- 무균 PBS 또는 생리식염수로 조직을 씻어 혈액, 불순물을 제거한다.

2. 소화효소 선택

- 조직 유형에 따라 소화효소를 선택해 과도한 소화로 인한 세포 손상을 피한다.

- 소화 시간은 엄격히 조절 (보통 10-30 분)해야하며 현미경을 통해 세포의 해리 상태를 관찰 할 수 있습니다.

2. 배양조건의 최적화

1. 배양기 선택

- 혈청 또는 특정 성장인자를 포함하는 배양기(예: DMEM, RPMI 1640 등)를 사용하며, 일부 세포는 인슐린, EGF 등을 첨가해야 한다.

- 배양기 브랜드나 로트 교체가 잦지 않아 세포 적응 스트레스를 줄인다.

2. 벽과 전대

- 원대세포는 벽에 붙이는 능력이 약하여 피배양접시(예를 들어 콜라겐, 폴리우레탄산)를 싸야 할 수도 있다.

- 대물림 시 밀도는 70~80% 로 조절하는 것이 좋으며, 과도한 합류는 접촉 억제와 분화를 초래할 수 있다.

3. 오염통제

1.무균 조작

- 전 과정을 초정대에서 조작하고 일회용 소모품을 사용하여 교차 오염을 피한다.

- 배양기에 이중항성을 첨가할 수 있지만 장기간 사용하면 세포 활성에 영향을 줄 수 있다.

2.지원체 검사

- 정기적으로 지원체 오염(예: PCR법)을 검사하고, 오염 후 세포를 즉시 버려야 한다.

4. 상태 모니터링

1.일상 관찰

- 매일 세포 형태, 밀도 및 배지 색상을 검사하고 배지를 즉시 교체합니다 (일반적으로 2-3일에 한 번씩).

- 비정상적인 형태 (예: 세포가 둥글고 조각이 증가하는 경우) 는 오염이나 영양 부족을 나타낼 수 있습니다.

2.전대와 동존

- 원대세포의 분열 횟수가 제한적(일반 5-10대)이므로 조기 대차세포를 제때에 동결 보관해야 한다.

- 동존액은 DMSO+ 혈청(또는 전용 동존배지)을 사용하는 것이 좋으며, 온도가 내려가면 액체질소로 보존한다.