인자궁 내막 상피세포

인자궁 내막 상피는 자궁 조직에서 분리된다.자궁은 태아를 잉태하는 기관으로 분강 중부, 방광과 직장 사이에 위치하며 그 위치는 방광과 직장의 충만 정도나 체위에 따라 변화할 수 있다.자궁의 정상적인 위치는 주로 자궁의 여러 인대, 분격, 요생식격 및 회음중심건 등 구조에 의해 유지되는데 이런 구조가 손상되거나 이완될 때 자궁탈수를 일으킬수 있다.자궁내막 즉 점막은 상피 (단층주상피에 속하며 분비세포와 섬모세포 2종이 있음) 와 고유막 (결단조직으로 구성되며 그 안에 대량의 성형세포가 있어 기질세포라고 부른다.) 으로 구성되며 자궁내막은 얕은 표면의 기능막과 깊은 부분의 기저층으로 나눌수 있으며 기능층이 비교적 두껍고 내막의 두께를 차지하는4/5；기저층은 비교적 얇고 치밀하며 약 1/5을 차지하며 기능층은 벗길 수 있지만 기저층은 벗길 수 없다.자궁내막 상피세포의 주요 기능: ①자궁내막은 자궁점막이라고도 하는데 포유류의 자궁내벽을 구성하는 층을 말한다.② 자궁내막은 에페드린과 프로게스테론에 반응하므로 성주기(발정주기, 생리주기)에 따라 현저한 변화가 있을 수 있다.자궁내막은 배아 부식과 밀접한 관련이 있어 생식 생리 연구에서 중요한 위치를 차지한다.배아가 모체와'대화'하는 과정에서 자궁내막 상피세포는 극히 중요한 역할을 한다.자궁내막은 암컷 포유동물의 자궁벽의 가장 내층을 구성하며 자궁강면에 위치하여 동물의 생식생리활동에서 중요한 지위를 차지한다.자궁과 자궁내막은 암컷 동물의 생리기능과 출산능력을 유지하는 중요한 기관으로 자궁내막의 재생복원은 자궁의 중요한 생리기능이다.체외에서 배양된 자궁내막 상피세포는 그 생리기능, 약물작용 및 각종 질병을 일으키는 요소의 작용하에서의 병리생리변화를 연구하는데 중요한 의의가 있다.
방법 소개:

회사 실험실에서 분리된 사람의 자궁내막 상피는 콜라겐 효소 소화법을 채택하여 상피세포 전용 배양기 배양 선별과 결합하여 제조한 것으로, 세포 총량은 대략5×10?cells/병.
품질 검사:

회사 실험실에서 분리된 사람 자궁내막 상피경Cytokeratin-19 면역형광감정은 순도가 90% 이상에 달하며 HIV-1, HBV, HCV, 지원체, 세균, 효모와 진균 등을 함유하지 않는다.

당사의 모든 제품은 과학 실험만을 제공하며, 기타 과학 실험 외의 사용은 하지 않습니다!

패키지 피조건 쥐꼬리 콜라겐I (2-5μg/cm2)

배양기 함FBS、성장첨가제, 페니실린, 스트립토마이신 등

환액 주파수 매2-3일에 한 번씩 환액

성장 특성 벽에 붙이다

세포 형태 상피세포 샘플

세대 간 특성 전달 가능2-3세대

소화액 0.25% yi 프로테아제

배양 조건 기상: 공기,95%；CO2, 5%

준비 작업

1.실험기자재 준비: 무균의 배양접시, 배양병, 이액관, 원심관, 수술기구 등을 준비하고 고압멸균 또는 기타 적합한 소독처리를 한다.

2.시약 준비: 적합한 배양기, 소화효소 (예: 콜라겐효소 등), 태우혈청, 쌍항 등 시약을 조제 또는 구매하여 무균하고 유효기간 내에 확보한다.

3.실험동물 또는 조직원천준비: 실험수요에 따라 적합한 동물을 선택하고 상응한 마취 또는 처형을 진행하여 필요한 조직을 획득한다.또는 기존 조직 샘플 라이브러리에서 조직을 가져옵니다.

취재와 처리

1.취재: 무균조건하에서 목표조직을 신속히 제거하여 조직에 대한 손상을 최소화하고 불필요한 지방, 결단조직 등 비목적조직을 제거한다.

2. 세척: 추출한 조직을 미리 차가운 무균 PBS로 수차례 씻어 혈액과 불순물을 제거한다.

3. 잘라내기: 후속 소화를 위해 조직을 약 1-2mm³의 작은 조각으로 잘라냅니다.

세포 분리

1. 소화: 잘게 자른 조직 덩어리를 적당량의 소화효소가 함유된 원심관에 넣고 37 ℃ 의 항온 흔들침대나 배양상자에서 일정 기간 소화한다.그 동안 원심관을 가볍게 흔들어 소화를 균일하게 한다.

2.소화 중지: 조직 덩어리가 대부분 단세포 현액 또는 소세포 덩어리로 소화될 때 혈청을 함유한 배지를 넣어 소화를 중지한다.

3. 여과와 원심: 세포체로 세포현액을 여과하여 소화되지 않은 조직파편을 제거한후 여과액을 적당한 회전속도로 원심분리하여 세포침전을 수집한다.

세포 관찰 및 검사

1.일상 관찰: 매일 거꾸로 현미경으로 세포의 형태, 생장 상태, 밀도 등을 관찰하고 세포의 변화 상황을 기록한다. 예를 들어 세포 오염이나 이상이 발견되면 즉시 상응하는 조치를 취한다.
2.세포 계수 및 활력 검사: 필요할 때 대망람 염색 등 방법으로 세포에 대해 계수와 활력 검사를 진행하여 세포의 생장 상황과 건강 상태를 파악할 수 있다.

1. 취재와 분리

1. 빠른 조작

- 조직 취재 후 즉시 처리하여 실온이나 비영양 환경에 장시간 노출되지 않도록 한다.

- 무균 PBS 또는 생리식염수로 조직을 씻어 혈액, 불순물을 제거한다.

2. 소화효소 선택

- 조직 유형에 따라 소화효소를 선택해 과도한 소화로 인한 세포 손상을 피한다.

- 소화 시간은 엄격히 조절 (보통 10-30 분)해야하며 현미경을 통해 세포의 해리 상태를 관찰 할 수 있습니다.

2. 배양조건의 최적화

1. 배양기 선택

- 혈청 또는 특정 성장인자를 포함하는 배양기(예: DMEM, RPMI 1640 등)를 사용하며, 일부 세포는 인슐린, EGF 등을 첨가해야 한다.

- 배양기 브랜드나 로트 교체가 잦지 않아 세포 적응 스트레스를 줄인다.

2. 벽과 전대

- 원대세포는 벽에 붙이는 능력이 약하여 피배양접시(예를 들어 콜라겐, 폴리우레탄산)를 싸야 할 수도 있다.

- 대물림 시 밀도는 70~80% 로 조절하는 것이 좋으며, 과도한 합류는 접촉 억제와 분화를 초래할 수 있다.

3. 오염통제

1.무균 조작

- 전 과정을 초정대에서 조작하고 일회용 소모품을 사용하여 교차 오염을 피한다.

- 배양기에 이중항성을 첨가할 수 있지만 장기간 사용하면 세포 활성에 영향을 줄 수 있다.

2.지원체 검사

- 정기적으로 지원체 오염(예: PCR법)을 검사하고, 오염 후 세포를 즉시 버려야 한다.

4. 상태 모니터링

1.일상 관찰

- 매일 세포 형태, 밀도 및 배지 색상을 검사하고 배지를 즉시 교체합니다 (일반적으로 2-3일에 한 번씩).

- 비정상적인 형태 (예: 세포가 둥글고 조각이 증가하는 경우) 는 오염이나 영양 부족을 나타낼 수 있습니다.

2.전대와 동존

- 원대세포의 분열 횟수가 제한적(일반 5-10대)이므로 조기 대차세포를 제때에 동결 보관해야 한다.

- 동존액은 DMSO+ 혈청(또는 전용 동존배지)을 사용하는 것이 좋으며, 온도가 내려가면 액체질소로 보존한다.