인간 신경 소교질 세포

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인간의 신경소교질은 뇌조직에서 분리된다.대뇌는 좌우 두 반구, 대뇌피질로 나뉜다(회색질) 각 대뇌 반구의 대부분을 덮고 있으며, 그것은 뉴런 포자가 집중된 곳이다.내부는 신경섬유나 멍게로 구성된 백질이다.각 반구에는 세 개의 면이 있는데, 즉 외측면 (전체 피질 면적의 약 1/3), 내측면과 밑면 (2/3의 면적) 이다.반구 표면에는 깊이가 같지 않은 도랑이나 갈라짐, 도랑이나 갈라짐 사이의 융기가 많이 있는데, 그것들은 대뇌의 표면적을 크게 증가시킨다;대뇌 외측면의 중요한 도랑, 파열은 대뇌 외측 파열, 정침 파열과 중앙 도랑이 있다.세 갈래로 갈라진 경계 간격 때문에 대뇌피질 그룹은 전두엽, 정엽, 측두엽, 침엽의 네 부분으로 나뉜다.소교세포는 신경교세포의 일종으로 뇌와 척수에 있는 대식세포에 해당하며 중추신경계(CNS)에 있는 도이자 가장 주요한 면역방어선이다.소교세포는 대뇌의 신경교세포의 약 20% 를 차지하는데 소교세포는 끊임없이 중추신경계의 손상된 신경, 반점 및 감염성물질을 제거하고있다.수많은 임상 및 신경리학 연구에 따르면 활성화된 소교세포는 파킨슨병, 다발성 경화, 알츠하이머 등 신경퇴화류 질병의 발병 메커니즘에서 매우 중요한 역할을 한다.그러나 지나치게 활성화되거나 통제력을 잃은 소교세포는 신경독성을 일으킬 수 있다.이들은 종양괴사인자 (TNF), 일산화질소, 인터루킨과 같은 신경독성이 있는 물질과 같은 염증 촉진 인자와 산화 스트레스의 중요한 원천이다.신경소교세포의 주요기능: ①신경교질은 대뇌발육초기에 성숙단계로 전환되는 과정에 나타난다.② 절차성 세포가 죽었을 때, 또는 뇌가 발달하는 과정에서 중추신경계가 손상되거나 병리적으로 손상되었을 때 신경교질은 뇌의 대식세포가 될 수 있다.③ 교세포는 Ⅱ류 조직 상용성 복합체가 CD-4 양성 T세포를 발현할 때 항원을 발현할 수 있으며, Fc가 매개하는 대식작용을 할 수 있으며, 조혈모세포와 대식모세포 조직과 항원을 공유한다.
방법 소개:

회사 실험실에서 분리된 사람의 신경 소교질은 효소 소화법 결합 차속 밀착법을 채택하여 배양기 영양이 결핍된 지 수일 후 요상 진동을 거쳐 탈락 세포를 수집하여 제조하였는데, 세포 총량은 대략5×10?cells/병.
품질 검사:

회사 실험실에서 분리된 인간 신경소교질경CD11b는 면역형광감정으로 순도가 90% 이상에 달하며 HIV-1, HBV, HCV, 지원체, 세균, 효모와 진균 등을 함유하지 않는다.

배양기 함FBS、성장첨가제, 페니실린, 스트립토마이신 등

환액 주파수 매2-3일에 한 번씩 환액

성장 특성 벽에 붙이다

세포 형태 북형, 다각형

세대 간 특성 종말분화세포에 속한다.불증식 세포군에 속하다

소화액 리도카인(12mM)

배양 조건 기상: 공기,95%；CO2, 5%

준비 작업

1.실험기자재 준비: 무균의 배양접시, 배양병, 이액관, 원심관, 수술기구 등을 준비하고 고압멸균 또는 기타 적합한 소독처리를 한다.

2.시약 준비: 적합한 배양기, 소화효소 (예: 콜라겐효소 등), 태우혈청, 쌍항 등 시약을 조제 또는 구매하여 무균하고 유효기간 내에 확보한다.

3.실험동물 또는 조직원천준비: 실험수요에 따라 적합한 동물을 선택하고 상응한 마취 또는 처형을 진행하여 필요한 조직을 획득한다.또는 기존 조직 샘플 라이브러리에서 조직을 가져옵니다.

취재와 처리

1.취재: 무균조건하에서 목표조직을 신속히 제거하여 조직에 대한 손상을 최소화하고 불필요한 지방, 결단조직 등 비목적조직을 제거한다.

2. 세척: 추출한 조직을 미리 차가운 무균 PBS로 수차례 씻어 혈액과 불순물을 제거한다.

3. 잘라내기: 후속 소화를 위해 조직을 약 1-2mm³의 작은 조각으로 잘라냅니다.

세포 분리

1. 소화: 잘게 자른 조직 덩어리를 적당량의 소화효소가 함유된 원심관에 넣고 37 ℃ 의 항온 흔들침대나 배양상자에서 일정 기간 소화한다.그 동안 원심관을 가볍게 흔들어 소화를 균일하게 한다.

2.소화 중지: 조직 덩어리가 대부분 단세포 현액 또는 소세포 덩어리로 소화될 때 혈청을 함유한 배지를 넣어 소화를 중지한다.

3. 여과와 원심: 세포체로 세포현액을 여과하여 소화되지 않은 조직파편을 제거한후 여과액을 적당한 회전속도로 원심분리하여 세포침전을 수집한다.

세포 관찰 및 검사

1.일상 관찰: 매일 거꾸로 현미경으로 세포의 형태, 생장 상태, 밀도 등을 관찰하고 세포의 변화 상황을 기록한다. 예를 들어 세포 오염이나 이상이 발견되면 즉시 상응하는 조치를 취한다.
2.세포 계수 및 활력 검사: 필요할 때 대망람 염색 등 방법으로 세포에 대해 계수와 활력 검사를 진행하여 세포의 생장 상황과 건강 상태를 파악할 수 있다.

1. 취재와 분리

1. 빠른 조작

- 조직 취재 후 즉시 처리하여 실온이나 비영양 환경에 장시간 노출되지 않도록 한다.

- 무균 PBS 또는 생리식염수로 조직을 씻어 혈액, 불순물을 제거한다.

2. 소화효소 선택

- 조직 유형에 따라 소화효소를 선택해 과도한 소화로 인한 세포 손상을 피한다.

- 소화 시간은 엄격히 조절 (보통 10-30 분)해야하며 현미경을 통해 세포의 해리 상태를 관찰 할 수 있습니다.

2. 배양조건의 최적화

1. 배양기 선택

- 혈청 또는 특정 성장인자를 포함하는 배양기(예: DMEM, RPMI 1640 등)를 사용하며, 일부 세포는 인슐린, EGF 등을 첨가해야 한다.

- 배양기 브랜드나 로트 교체가 잦지 않아 세포 적응 스트레스를 줄인다.

2. 벽과 전대

- 원대세포는 벽에 붙이는 능력이 약하여 피배양접시(예를 들어 콜라겐, 폴리우레탄산)를 싸야 할 수도 있다.

- 대물림 시 밀도는 70~80% 로 조절하는 것이 좋으며, 과도한 합류는 접촉 억제와 분화를 초래할 수 있다.

3. 오염통제

1.무균 조작

- 전 과정을 초정대에서 조작하고 일회용 소모품을 사용하여 교차 오염을 피한다.

- 배양기에 이중항성을 첨가할 수 있지만 장기간 사용하면 세포 활성에 영향을 줄 수 있다.

2.지원체 검사

- 정기적으로 지원체 오염(예: PCR법)을 검사하고, 오염 후 세포를 즉시 버려야 한다.

4. 상태 모니터링

1.일상 관찰

- 매일 세포 형태, 밀도 및 배지 색상을 검사하고 배지를 즉시 교체합니다 (일반적으로 2-3일에 한 번씩).

- 비정상적인 형태 (예: 세포가 둥글고 조각이 증가하는 경우) 는 오염이나 영양 부족을 나타낼 수 있습니다.

2.전대와 동존

- 원대세포의 분열 횟수가 제한적(일반 5-10대)이므로 조기 대차세포를 제때에 동결 보관해야 한다.

- 동존액은 DMSO+ 혈청(또는 전용 동존배지)을 사용하는 것이 좋으며, 온도가 내려가면 액체질소로 보존한다.