쥐 원대 세포

쥐 원대 세포전대 방법:

1. 접벽세포의 소화법 전대

1. 병 안의 오래된 배양액을 빨아들이거나 버려라.

2. 소화액(EDTA와 혼합액) 1ml 정도를 넣고 배양병을 가볍게 흔들어 병 밑의 세포가 모두 용액에 잠기게 한다.

3. 소화 2-5분 후 배양병을 현미경 아래에 놓고 관찰한 결과, 원래 벽에 붙인 세포가 점차 원형으로 변하는 것을 발견하고, 아직 떠내려가지 않았을 때 소화액을 버리고 배양액을 넣어 소화를 종료한다.

4. 빨대로 벽에 붙인 세포를 불어 현액으로 만들어 각각 다른 2~3개의 배양병에 접종하고 37 ℃ 배양상자에 넣어 계속 배양한다.다음 날 벽에 붙이는 생장 상황을 관찰하다.

2. 부유세포의 전대

1. 직접 전대

1) 현탁세포를 천천히 병바닥에 가라앉힌 후 상청을 1/2-2/3 흡수한다.

2) 빨대로 불어 세포현액을 형성한 후, 각각 다른 2~3개의 배양병에 접종하여 37 ℃ 배양상자에 넣어 배양한다.

2. 원심법 전대

1) 세포를 배양액과 함께 원심관 안으로 옮겨 원심분리 800-1000rpm, 5분.

2) 상청을 제거하고 새로운 배양액을 첨가하여 원심관 안에서 빨대로 불어 세포현액을 형성한다.

3) 세포현액을 각각 다른 2~3개의 배양병에 접종하고 37 ℃ 배양상자에 넣어 배양한다.

쥐 원대 세포배양 중 5가지 일반적인 오류

오류 1:소관 원대 세포 가 수욕 중 에서 일정 기간 해동 하다

수정 1: 원래 세포는 해동 과정에 매우 민감하기 때문에 작은 병을 37 ℃ 의 수욕에 넣고 내용물이 막 해동될 때까지 유지하고 가볍게 회전하는 것이 중요하다.그리고 즉시 수욕에서 작은 병을 꺼내 무균 조작대로 옮겨야 한다.즉시 세포 접종에 사용할 수 있도록 배양병이 해동되기 전에 준비되었는지 확인하고 배양함에 넣으십시오.

오류 2:작은 병을 해동한 후 직접 원심 세포를 분리한다.

수정 2:우리는 원심분리 프로그램이 소량의 DMSO 잔류보다 더 해롭기 때문에 해동 후 원심 분리 세포를 권장하지 않습니다.원대세포를 회복한 다음 날 잔류 DMSO를 제거하기 위해 배양기를 교체하는 것을 기억하십시오.

오류 3:원대세포가 지나치게 융합되도록 허용하다

수정 3:100이 합류할 때까지 성장하면 원대세포는 노화될 수 있다.원래 세포는 100 순수하지 않기 때문에 오염된 세포의 성장을 최소화하는 것이 중요하다는 것을 기억하십시오.우리는 세포가 90~95% 융합에 이르렀을 때 원대세포를 전대배양할것을 건의한다.

오류 4:원대세포는 쉽게 다시 동존할 수 있다

수정 4:일반적으로 우리는 세포 노화를 촉진하거나 기능 변화를 초래 할 수 있기 때문에 원래 세대 세포를 다시 동결하는 것을 추천하지 않습니다.원대세포는 매우 민감해서 다시 동결하면 세포가 죽거나 손상될 수 있다.

오류 5:원대세포는 무한히 증식할 수 있다

수정 5:세포계와 달리 원대세포는 제한된 증폭 능력을 가지고 있다.우리는 가능한 한 빨리 원대세포를 사용하여 실험을 진행하여 유전의 표류를 방지할 것을 건의한다.또한 부가가치가 어려운 세포 유형을 사용하고 있다면 세포 형태를 면밀히 모니터링해야 한다. 소량의 혼합 세포 (예: 섬유질 세포) 가 시간이 지남에 따라 대량으로 성장하여 주요 세포가 될 수 있기 때문이다.