RK-13(토끼신장세포계)

세포 처리:

1) 동존세포의 소생:

세포현액 1mL를 함유한 동존관을 37℃ 수욕에서 빠르게 흔들어 해동하고, 배지 4~6mL를 함유한 원심관에 넣어 골고루 섞는다.1000RPM 조건에서 원심분리 3-5min, 상청액을 버리고 배양기 중현세포.그런 다음 세포 현액을 6-8ml 배양기가 함유 된 배양병 (또는 그릇) 에 37 ℃ 배양하여 밤을 보냅니다.다음 날 현미경으로 세포의 생장 상태와 세포 밀도를 관찰한다.

2) 세포 대물림: 세포 밀도가 80~90% 에 달하면 대물림 배양을 할 수 있다.

밀착 세포 전대의 경우 다음 방법을 참조할 수 있습니다.

1. 상청 배양을 버리고 칼슘, 마그네슘 이온이 함유되지 않은 PBS로 세포를 1~2회 윤색한다.

2.0.25%(w/v)-0.53mM EDTA를 배양병(T25병 1-2mL, T75병 2-3mL)에 넣고 37℃ 배양함에 넣어 1~2분(소화가 어려운 세포는 소화시간을 적당히 연장할 수 있음) 소화시킨 후 현미경으로 세포의 소화상태를 관찰하고 세포가 대부분 둥글게 변하고 탈락하면 신속하게 조작대로 가져와 배양병을 몇 번 두드린 후 3-4ml 함유된 10BS를 넣어 배양을 종료한다.

3.가볍게 두드린 후 흡출, 1000RPM 조건에서 원심 3-5min, 맑은 액체를 버리고 1-2mL 배양액을 보충한 후 불어준다.세포현액을 1:2의 비율로 새 T25병에 나누어 6~8ml의 설명서에 따라 배치한 새로운 배양기를 첨가하여 세포의 생장활력을 유지하고 후속전대는 실제상황에 따라 1:2~1:5의 비율로 진행한다.

3) 세포동존: 세포를 접수한후 배양전 3세대에 일련의 세포종자를 동존시켜 후속실험에 사용할것을 건의한다.

RK-13(토끼신장세포계)

상품 속성

상품 소개

나이(성별) 5주령

조직 소스 신장

성장 특성 밀착세포

세포 형태 상피세포 샘플

생물안전등급 2

성장배지 MEM+10% FBS+1% P/S

추천 전대 비율 1:2-1:4

추천 환액 주파수 2 ~ 3회/주

냉동 저장 조건

냉동 보관액:55% 기초배지 +40% FBS+5% DMSO

온도: 액체 질소

배양 조건

기상: 공기,95%；CO2, 5%

온도37℃

세포 전대 배양 조작 절차:

(1) 현미경하에서 세포형태와 생장밀도가 90% 에 달하면 전대한다.

(2) 배양액을 흡입한다.PBS를 첨가해 1~2회 세척하고 흔들어 버린다.

(3) 커버 병 바닥의 양을 추가하고 EDTA를 포함한다.

(4) 배양병은 37 ℃ 배양상자에 넣어 소화하고 3min 정도에 꺼내 현미경으로 세포의 80% 를 넘는 양이 있는지 관찰하여 수축이 둥글고 세포의 간극이 커진다.배양병을 가볍게 두드려 남은 세포를 탈락시키고 2배량의 소화중지를 넣고 골고루 불어 과도한 소화를 피한다.

(5) 세포현액은 원심관 안으로 빨아들여 1000rpm/min 원심 3~5min.

(6) 상청을 흡입하고 배양액 중현세포를 첨가하여 세포를 불어 균일하게 분산시킨다.

(7) 세포현액을 흡입하고 적합한 밀도를 선택하여 새 배양병에 접종하고 배양액을 보충하고 흔들어 37 ℃ 의 CO2 배양상자를 배치하여 배양한다.

(8) 세포의 성장상태에 따라 환액 또는 전대시간을 확정한다.

(9) 세포 동존

세포 접수 후 처리:

1) 세포를 받은 후, 75% 의 알코올 소독병 벽은 T25병을 37 ℃ 배양함에 약 2-3h 배치하고, 배양병이 파손되고, 액체가 넘치고, 세포가 오염된 것을 발견하면, 사진을 찍은 후 즉시 우리에게 연락하십시오.

2) 4 또는 5X 현미경으로 세포 상태를 확인하고, 동시에 방금 받은 세포에 사진 (10 ×, 20 ×) 각 2-3장 및 배양병 외관 사진 1장을 남겨 판매 후 받았을 때 세포 상태의 근거로 삼으십시오.

3) 밀착 세포: 세포는 37 ℃ 배양함에 2-3h를 배치하고 현미경으로 세포의 성장과 밀착 상황을 관찰한다. 일부 밀착 세포는 택배 운송 과정에서 진동으로 탈락하고 탈락한 후 뭉치는 경우가 있다.거울로 세포의 생장밀도가 60% 이하인 것을 관찰하면 배양병의 관액배지 (벽에 붙지 않은 세포가 원심회수가 필요하면 원배지병에 다시 걸어넣는다) 를 제거하고 새로 배합한 배지 6-8mL를 첨가하여 세포배지함에 넣어 계속 배양할 수 있다.세포의 성장밀도가 70~80% 이상이면 세포를 대물림할 수 있다.전대 과정에서 운송 진동으로 탈락한 세포는 원심 회수가 필요하다.

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