유산탈수소효소활성(WST-8법) 미량법

젖산탈수소효소(LDH는) 활성 미량법 측정의 원리검사는 통과했고LDH는촉매 아세톤산이 젖산으로 환원되는 과정에서NADH는의 생성량으로 간접 측정LDH는의 활성.

구체적인 절차는 다음과 같다.

반응원리:에서LDH는의 작용으로NAD+는생성이 복원됨NADH는。NADH는와WST-8은상호 작용하여 색상을 생성하여 비교 측정 (람다최대=450 nm）‌。

반응 조건:LDH는하다NAD는다음으로 복원NADH는，NADH는와WST-8은상호작용으로 색깔이 생기다.이 반응은 얼음 위에서 빛을 피하여 진행되며, 각 그룹 (예:분석 버퍼、유산、NAD는、WST-8은、Enhancer는) 실험하기 전에 냉장고에서 꺼내 실온으로 균형을 맞춰야 하며, 전체 과정은 빛을 피하고 조작해야 한다.

흡광도 측정:에서450nm파장 하에서 흡광도, 흡광도와LDH는활성은 정비례하여, 비색법으로 측정할 수 있다.LDH는의 활성.

실험 절차와 필요한 설비:

실험 단계:준비물 (1×분석 버퍼、NAD는、WST-8은、Enhancer는화유산혼합), 작업액을 첨가96구멍판 또는 미량 유리 비색 그릇에 측정할 샘플을 넣고37℃ 항온에서 일정 시간 부화한 후 흡광도를 측정한다.

필요한 장비:효소 측정기 또는 가시 분광 광도계 (측정 가능450nm장소의 흡광도), 항온상자, 제빙기, 저온원심기,96공판이나 미량의 유리비색그릇, 조절식리액총 및 총머리, 이온제거수, 균장기(조직견본의 경우).

실험 고려사항‌：

시약 보관:그룹별 (예:분석 버퍼、유산、NAD는、WST-8은、Enhancer는) 얼음 위에 빛을 피하여 보존해야 하며, 반복적으로 얼지 않도록 해야 한다.

작업 고려 사항:전체 실험 과정은 얼음 위에서 빛을 피하여 진행해야 하며, 빛이 결과에 영향을 주지 않도록 해야 한다‌。