FITC-Annexin V/PI 세포 사멸 시약함

FITC-Annexin V/PI 세포 사멸 시약함

제품 번호:F6012L는

제품 사양:100T

저장 조건:

4℃빛을 피하고 냉장하니 냉동 보관하지 마시오.유효기간 외 포장。

스펙트럼 특성:

FITC-Annexin V: Ex/Em = 494/518 nm

PI: Ex/Em = 535/617 nm (DNA와 함께)

제품 설명:

FITC-Annexin V/PI는조망 시약 상자는 조기 조망 세포 (녹색) 와 괴사 또는 말기 조망 세포를 표시하여 빠르고 간편한 방법을 제공합니다.(적색) 세포의 쇠망 수준을 측정하다.제품은 유동식 세포계나 기타 형광 검사 설비를 사용하여 검사할 수 있다.

Annexin V는(막연단백질- V) 은 분자량입니다.35-36KD의Ca는2+의존성 인지 결합 단백질, 인지 아세틸 (PS) 선택적 결합.아세틸 (PS) 주로 세포막 안쪽, 즉 세포장과 인접한 쪽에 분포한다.세포가 죽는 초기에는 서로 다른 유형의 세포가 인지질을아세틸외가 세포 표면으로 뒤집혀 세포 외 환경에 노출되다.이때 녹색 형광 프로브 사용FITC는표식의Annexin V는즉,FITC-Annexin V는，바깥으로 뒤집힌 아세틸(PS) 결합하면 류식세포계나 형광현미경으로 인지아세틸의 외전이라는 세포가 죽는 중요한 특을 직접 검출할 수 있다징집하다.괴사나 말기에 죽는 세포는 세포의 완전성이 이미 파괴되었기 때문에FITC-Annexin V는포장과 인지층 안쪽에 있는PS결합하여 괴사세포도 녹색 형광을 띠게 한다.

요오드화 피리딘(이오다이드 프로피이이이이이이오다이드 프로피이이이이이이오다이드 프로피이이이이이이오다이드) 은DNA는염료와 결합하면, 그것은 괴사 세포나 멸망 말기에 세포막의 완전성을 상실한 세포의 가는 염색을 할 수 있다포핵.PI는... 할 수 있다488、532 또는546nm레이저를 자극하여 적색 형광을 나타내다.

사용 방법:

1. 실험 설계:

공백관: 음성 대조군 세포, 첨가하지 않음FITC-Annexin V/PI는. 전압 조절에 사용됩니다.

단염관: 양성 대조군 세포, 첨가만FITC-Annexin V/는더하기PI는. 보상을 조정하는 데 사용됩니다.

검사관: 처리된 세포, 추가FITC-Annexin V/PI는. 빈 파이프와 단일 염색 파이프로 전압 보정을 조절한 후 필요한 스트리밍 데이터를 얻습니다.

2. 세포 수집:

(1) 부유 세포의 경우:

a.세포 멸망 자극을 한 후,1000 rpm원심5 분, 상청을 버리고, 세포를 수집하고,PBS는세포를 가볍게 중상하고 계수하다.참고:PBS는중현상은 생략할 수 없습니다.PBS는다시 매달리는 과정은 동시에 세포를 세척하는 작용을 하여 후속을 보장할 수 있다FITC-Annexin V는의 결합.

b.取5×104 -1×105개의 무거운 세포,1000 rpm원심5 분, 상청을 버리고 가입100 µL 1 × Annexin V완충액과 결합하여 가볍게 세포를 중현하다.

c.가입5µL FITC-Annexin V, 가볍게 섞는다.

d.가입5 µL PI염색액으로 가볍게 섞어주세요.

e.실온(20-25ºC)빛을 피해 부화하다.10-15분. 알루미늄 포일을 사용하여 빛을 피할 수 있습니다.부화 과정 중 에는 세포 를 중현 시킬 수 있다2-3다음으로 염색 효과를 개선하다.

(2) 밀착 세포의 경우:

a.세포 배양액을 적당한 원심관 안으로 빨아들이고,PBS는패치 세포를 한 번 씻고, 적당량의 세포 소화액을 첨가한다.(없음EDTA)소화 세포.실온에서 가볍게 불면 밀착세포가 떨어질 때 세포소화액을 빨아들일 수 있다.피해야 할 과소화.참고: 밀착 세포의 경우 소화 단계가 중요합니다.소화 시간이 너무 짧으면 세포가 세게 불어야 떨어져 세포막에 손상을 입혀 세포가 괴사하는 가양성을 초래하기 쉽다.소화 시간이 너무 길면 마찬가지로 세포막 손상을 초래하여 세포가 괴사하는 가짜 양성이 나타나기 쉬우며, 심지어 세포막의 인지아세틸과FITC-Annexin V는의 결합은 세포의 쇠망에 대한 검사를 방해한다.

b.지난 단계에서 수집한 세포 배양액을 첨가하여 세포를 가볍게 불어 떨어뜨려 원심관 안으로 옮기고,1000 rpm원심5 분, 상청을 버리고, 세포를 수집하고,PBS는세포를 가볍게 중상하고 계수하다.주: 이전 단계의 세포 배양액을 첨가하는 것은 매우 중요합니다. 한편으로는 이미 떠 있는 쇠망이나 괴사가 발생한 세포를 수집할 수 있고, 다른 한편으로는 세포 배양액의 혈청이 잔류를 효과적으로 억제하거나 중화시킬 수 있습니다.남아있는 건 소화가 되고 분해가 돼서 나중에 넣어요.FITC-Annexin V는, 염색 실패를 초래합니다.

c.取5×104 -1×105개의 무거운 세포,1000 rpm원심5 분, 상청을 버리고 가입100 µL 1 × Annexin V완충액과 결합하여 가볍게 세포를 중현하다.

d.가입5µL FITC-Annexin V, 가볍게 섞는다.

e.가입5 µL PI염색액으로 가볍게 섞어주세요.

f.실온(20-25ºC)빛을 피해 부화하다.10-15분. 알루미늄 포일을 사용하여 빛을 피할 수 있습니다.부화 과정 중 에는 세포 를 중현 시킬 수 있다2-3다음으로 염색 효과를 개선하다.

3. 결과 분석:

(1) 흐름식 세포계 검사:

a. 부화가 완료되면 400 μL 1 × Annexin V 결합 완충액 중현세포를 직접 첨가하여 즉시 검사할 수 있으며, FITC-Annexin V는 488 nm 레이저에 의해 자극되며, 형광 발사 스펙트럼은 530 nm (FITC 채널), PI 채널 발사 스펙트럼은 약 617 nm에 있다.

b. 이중 변수 흐름식 세포계의 산점도에서 왼쪽 아래 사분면은 살아있는 세포를 (FITC-Annexin V-/PI-);오른쪽 아래 사분면은 조기 멸망 세포로 (FITCAnnexin V+/PI-);오른쪽 위 사분면은 괴사와 말기 멸망 세포로 (FITC-Annexin V+/PI+);왼쪽 위 사분면은 (FITC-Annexin V-/PI+) 인 나체 핵 세포를 표시합니다.

(2) 형광 현미경 검사:

a. 1000 rpm 원심분리 5 min, 세포를 수집하고 400 µL 1 × Annexin V 결합 완충액으로 가볍게 세포를 다시 걸다.세포를 96공판으로 옮겨 잠시 가라앉히거나 세포도포를 한 뒤 형광현미경 아래 두고 관찰한다.

b. FITC-Annexin V는 FITC용 필터, PI는 Cy3 또는 Texas용 필터를 사용할 수 있습니다.

주의사항:

1. 사용하기 전에 제품을 순식간에 튜브 밑으로 원심을 분리한 다음 후속 실험을 진행하십시오.

2. 세포의 쇠망 과정을 낮추기 위해, 부화 과정은 얼음 위에서 조작할 수 있지만, 부화 시간은 적어도30 분。

3. 세포가 죽는 것은 빠른 과정이기 때문에, 샘플은 염색 후에1 시간안에서 분석하다.

4. 밀착 세포의 경우 소화가 중요한 단계입니다.밀착세포는 세포의 사멸을 유도할 때 부유세포가 있으면 부유세포와 밀착세포를 수집한 뒤 합병해 염색해야 한다.밀착 세포를 처리할 때는 인위적인 세포 손상을 피하기 위해 조심스럽게 조작해야 한다.소화시간이 너무 짧아 세포가 세게 불어야 떨어져 세포막에 손상을 입기 쉽고,PI는과다 섭취;소화시간이 너무 길면 세포막도 마찬가지로 손상을 초래하기 쉬우며 심지어 세포막의 인지아세틸과FITC-Annexin V는의 결합.소화 시 공판 바닥을 가득 깔고 가볍게 흔들 때 세포와 충분히 접촉한 뒤 대부분을 버리고 남은 소량을 이용해 일정 기간 더 소화한 뒤 세포 간 빈틈이 커지면 병 바닥이 꽃무늬 얼룩 모양으로 종료된다.소화제에서는 최대한 안 쓰도록 하겠습니다.EDTA는，EDTA는영향을 미침Annexin V는및PS의 결합.

5. 밀착세포는 소화 후 배양조건과 배양기에서 약 회복을 권장한다30 분후 염색으로 가양성을 피한다.

6. 세포를 세척할 때 세포가 손실되는 것을 피하기 위해 액체를 흡입할 때 큰 것을 사용할 수 있다팁머리에 작은 것을 덧씌우다팁두흡액.

7. 염료의 사용 농도는 구체적인 실험 요구에 의해 확정된다.

8. 형광 염료는 모두 담금질 문제가 존재하므로 보존과 사용 과정에서 가능한 한 빛을 피하여 형광 담금질을 늦추도록 주의하십시오.

9. 당신의 안전과 건강을 위해서 실험복을 입고 일회용 장갑을 끼고 조작하십시오.