Cell Counting Kit-8 세포 증식 검사 키트

Cell Counting Kit-8(CCK-8) 세포 증식 키트

상품 번호: C6005M

제품 사양: 500T

저장 조건:4℃빛을 피하여 보존하고, 장기간 저장하여 두다-20℃，유효기간 외 포장。

제품 설명:

세포 카운팅 키트-8약칭CCK8은(또는WST-8은) 시약함, 일종의 기반WST-8은(화학명:2-(2-메틸산소기-4-니트로벤젠 기)-3-(4-니트로벤젠 기)-5-(2,4-이황기 벤젠-2H-테트라졸 단나트륨염) 발색 반응은 세포 증식과 세포 독성에 널리 응용되는 신속하고 민감도 높은 검사 시약함이다.

WST-8은작동원리: 전자결합시약이 존재하는 조건에서 미토콘드리아내의 탈수소효소에 의해 고도의 수용성을 생성하는 주황색의 갑분산물(formazan은）。색깔의 깊이는 세포의 증식과 정비례하고 세포의 독성과 반비례한다.효소 측정기를 사용하여450nm파장부 측정OD는값은 살아있는 세포의 수를 간접적으로 반영한다.

WST-8은예MTT는의 업그레이드 대체 제품 및MTT는또는 기타MTT는유사한 제품:XTT는、MTS는등에 비해 뚜렷한 장점이 있다.먼저,MTT는미토콘드리아 내의 일부 탈수소효소에 의해 환원되어 생성된 메틸렌은 수용성이 아니며, 특정 용해액이 용해되어야 한다;그리고WST-8은、XTT는및MTS는발생한 갑옷은 모두 수용성이어서 후속 용해 절차를 생략할 수 있다.둘째,WST-8은생긴 갑언비XTT는및MTS는생긴 난제는 더 잘 녹는다.다시,WST-8은비교XTT는및MTS는더욱 안정적이고 실험결과를 더욱 안정시키다.또한,WST-8은및MTT는、XTT는선형보다 범위가 넓고 민감도가 높습니다.

CCK는법은 약물 선별, 세포 증식 측정, 세포 독성 측정, 종양 알레르기 시험 및 생물 인자의 활성 검사 등에 광범위하게 응용된다.

사용 방법:

1. 세포 활성 검사

（1) 에서96 공판 중 세포현액 접종(100 μL/구멍), 설정할 수 있는 것이 좋습니다.8 개 세포 농도 경도, 각 농도 설정6 개 반복 세포 포장, 예를 들어 세포 개수에 따라0/312.5/625/1250/2500/5000/10000/20000 세포/96구멍판을 깔다.배양판을 배양함에 넣어 밤을 새운다 (37℃,5%의 CO2）。

（2) 각 구멍에 추가10 μL CCK용액 (구멍에 기포가 생성되지 않도록 주의하십시오. 이 기포는 영향을 줄 수 있습니다OD는값의 눈금).참고: 제품 분석 시37℃수욕 처리로 사용에 지장이 없습니다.

（3) 배양판을 배양함 안에서 부화시킨다0.5 - 4 시간. 참고: 첫 번째 실험은0.5、1、2 및4 시간후에 각각 효소표시기로 검측한후 흡광도범위가 비교적 적합한 시점을 선택하여 후속실험에 사용한다.

（4) 효소 측정기로 측정하여450nm및600 nm(구멍판 밑바닥의 간섭을 없애는) 부분의 흡광도. （5) 잠시 측정하지 않으면OD는값, 각 구멍에 추가 가능10 μL 0.1 M의HCl은용액 또는1% w/v SDS용액, 그리고 배양판을 실온 조건에서 빛을 피하여 보존한다.24 시간내측량으로 흡광도는 변하지 않는다.

2.세포증식-독성검사

（1) 에서96 공판 중 접종100μL의 세포 현액, 권장 설정 가능8 개 세포 농도 경도, 각 농도 설정6 개 반복 세포 포장, 예를 들어 세포 개수에 따라0/312.5/625/1250/2500/5000/10000/20000 세포/96구멍판을 깔다.배양판을 배양함에 넣어 밤을 새운다 (37℃, 5%CO는2）

（2) 배양판에 추가1 ~ 10 μL특정 약물 자극.

（3배양함에서 일정 기간 부화 (예:6、12、24 또는48 시간）。

（4) 각 구멍에 추가10 μL CCK용액 (구멍에 기포가 생성되지 않도록 주의하십시오. 이 기포는 영향을 줄 수 있습니다OD는값의 눈금).참고: 제품 분석 시37℃수욕 처리로 사용에 지장이 없습니다.

（5) 배양판을 배양함 안에서 부화시킨다0.5 - 4 시간. 참고: 첫 번째 실험은0.5、1、2 및4 시간후에 각각 효소표시기로 검측한후 흡광도범위가 비교적 적합한 시점을 선택하여 후속실험에 사용한다.

（6) 효소 측정기로 측정하여450nm및600 nm(구멍판 밑바닥의 간섭을 없애는) 부분의 흡광도.

（7) 잠시 측정하지 않으면OD는값, 각 구멍에 추가 가능10 μL 0.1 M의HCl은용액 또는1% w/v SDS용액, 그리고 배양판을 덮어 빛을 피하여 실온 조건에 보존한다.24 시간내측량으로 흡광도는 변하지 않는다.

참고: 측정 대기 물질이 산화 또는 환원성이 있다면 더 추가할 수 있습니다CCK는기존에는 신선배지(배지를 제거하고 배지로 세포를 두 차례 세척한 뒤 새로운 배지를 넣는 것)를 교체해 약물 영향을 제거했다.물론 약물의 영향이 비교적 적은 경우에는 배지를 교체하지 않고 배지에 약물을 첨가한후의 공백흡수를 직접 공제하면 된다.

3. 계산 공식

세포 생존율=[(As-Ab)/(Ac-Ab)]x억제율=[(Ac-As)/(Ac-Ab)]x으로:실험구멍(세포를 함유한 배양기,CCK-8은, 테스트 대기 약물)의 흡광도AC:구멍 대조(세포를 함유한 배양기,CCK-8은, 테스트 대상 약물 없음)의 흡광도Ab:빈 구멍(세포와 대기 약물이 없는 배양기,CCK-8)의 흡광도

주의사항

1. 사용하기 전에 제품을 순식간에 튜브 밑으로 원심을 분리한 다음 후속 실험을 진행하십시오.

2. 사용96구멍은 세포포장을 하는데 배양시간이 비교적 길면 반드시 증발문제에 주의를 돌려야 한다.주위를 한 바퀴 도는 방법을 버리고 같은 양의 것으로 바꿀 것을 건의하다PBS는물이나 배양액.

3. 효소 측정기로 검사하기 전에 각 구멍에 기포가 없는지 확인해야 한다. 그렇지 않으면 측정에 방해가 될 수 있다.

4. 본 제품은 과학연구에 한하여 림상진단 또는 치료에 사용되여서는 안되며 식품이나 약품에 사용되여서는 안되며 일반주택에 보관해서는 안된다.

5. 당신의 안전과 건강을 위해서 실험복을 입고 일회용 장갑을 끼고 조작하십시오.