SCC7(생쥐 비늘형 세포 암세포)

1. 세포 기본 속성

조직 출처: 비늘형 세포암

성장 특성: 벽에 붙어서 성장

세포 형태: 상피 세포 샘플

배경 소개: SCC7 생쥐 비늘형 세포 암세포는 유기체의 조직이나 기관경, 콜라겐 효소, 기타 방법으로 단일 세포를 얻어 체외에서 시뮬레이션 유기체 환경에서 배양하는 세포를 말한다.

생물안전등급: 1

세포 규격: 1 × 106cells/T25 배양병 또는 1mL 냉동 보관관 포장

배양기: 1640+10% FBS

배양조건: 기상: 공기, 95%;이산화탄소, 5%온도: 섭씨 37도, 배양함 습도는 70~80% 입니다.

냉동 보관 조건: 냉동 보관액: 90% FBS, DMSO 10%,

추가 시간: 주 2~3회

전대 비율: 1: 2 전대

환액 빈도: 2-3일에 한 번 환액

2. 세포배양조작

1) 소생세포: 다음과 같은 세포배양 동존처리는 참고용으로만 제공되며 구체적인 조작절차는 수납제품설명서를 위주로 한다

세포현액 1mL를 함유한 동존관을 37℃ 수욕에서 빠르게 흔들어 해동하고 배지 4mL를 더해 골고루 섞는다.1000rpm 조건에서 원심분리 3min, 상청액을 버리고 배지 1~2mL를 첨가한 후 고루 분다.그리고 모든 세포현액을 적당량의 배양기가 함유된 배양병에 넣어 밤을 새운다(또는 세포현액을 6cm그릇에 넣고 약 4mL의 배양기를 넣어 밤을 새운다).셋째 날 환액하고 세포밀도를 검사한다.

2) 세포 대물림: 세포 밀도가 80~90% 에 달하면 대물림 배양을 할 수 있다.

a、세포가 배양병을 덮는 80% 면적까지 성장하면 25cm2 배양병의 배양액을 버리고 PBS로 세포를 한 번 세척한다.

b、소화액 0.25% 를 약 1ml 첨가하여 배양병에 넣고 현미경을 거꾸로 놓고 관찰한 후 세포가 수축되어 둥글게 변한 후 배양액을 첨가하여 소화를 중지한 후 다시 세포를 가볍게 불어 떨어뜨린 후 현액을 15ml 원심관으로 옮기고 1000rpm 원심 5min;

c、상청을 버리고 침전세포는 12ml 배양기로 중현한 후 1: 2 비율로 병을 나누어 대물림한 후 마지막에 37 ℃, 5% CO2 세포배양함에 넣어 배양한다;

d、세포가 벽에 붙으면 배양 결과를 관찰한 뒤 환액 배양이나 대물림을 한다.

3) 세포동존: 세포의 생장상태가 양호할 때 세포동존을 진행할 수 있다.다음 T25병을 예로 들자;

a、세포가 배양병을 덮는 80% 면적까지 성장하면 25cm2 배양병의 배양액을 버리고 PBS로 세포를 한 번 세척한다.

b、소화액 0.25% 를 약 1ml 첨가하여 배양병에 넣고 현미경을 거꾸로 놓고 관찰한 후 세포가 축소되어 둥글게 변한 후 배양액을 첨가하여 소화를 중지하고 세포를 가볍게 불어 떨어뜨린 후 현액을 15ml 원심관에 옮겨 1000rpm 원심 5min;

c、적당량의 동존액(FBS:DMSO=9:1)으로 세포를 중현시키고 동존관에 배치한다.

d、먼저 세포동존관을 -20 ℃ 1.5h에 배치한후 이를 -80 ℃ 에 옮겨 밤을 지내고 24h 후에 액질소에 옮겨 장기적으로 보존한다.프로그램 냉각 박스를 사용하면 -80 ℃ 에 직접 넣을 수 있습니다.

3. 배양 주의사항

1.세포를 받은 후 먼저 세포병이 완전한지, 배양액에 누액, 혼탁 등의 현상이 있는지 관찰하고, 상술한 현상이 발생하면 즉시 우리에게 연락하십시오.

2. 세포설명서를 자세히 읽고 세포형태, 사용배지, 혈청비례, 필요세포인자 등 세포관련 정보를 료해하여 세포배양조건이 일치하도록 확보한다. 만약 배양조건이 일치하지 않아 세포에 문제가 생기면 책임은 고객이 스스로 부담한다.

3.알코올 75%로 세포병 표면을 닦고 현미경으로 세포 상태를 관찰한다.운송 문제로 일부 세포가 온도 변화 및 격렬한 충돌로 파쇄되어 파편이 형성되는 것은 정상적인 현상이다.세포상태를 잘 관찰한후 75% 의 알콜소독병벽은 T25병을 37 ℃ 배양상자에 놓고 2-4h를 놓는다.

4.밀착 세포는 소화, 부상 세포는 직접 혼합하여 세포를 수집, 900 rpm-1000 rpm 원심 3 min, 폐기.PBS 중현세포 5mL를 더하고 900rpm-1000rpm 원심분리 3min을 더해 신선한 배양기로 중현세포를 중현하고 새로운 배양병이나 배양접시에 접종해 배양함에 넣어 배양한다.

5. 고객은 동일한 조건의 배양기로 세포 배양에 사용하십시오.

6.고객이 세포를 받은 후 3일 전에 각각 몇 장의 세포 사진을 찍고, 세포 상태를 기록하여 우리 회사 기술부와 쉽게 소통하고 교류할 수 있도록 건의합니다.운송의 원인으로 인해 개별적인 민감한 세포에 불안정한 상황이 나타날수 있으므로 제때에 우리에게 련락하여 세포의 구체적인 상황을 알려주어 우리의 기술자들이 문제가 해결될 때까지 추적답방할수 있도록 해야 한다.

7.이 세포는 과학 연구에만 사용됩니다.

8. 비고: 운송용 배양기(관액배양기)는 더 이상 세포를 배양하는 데 사용할 수 없습니다. 설명서 세포배양조건에 따라 새로 배양한 배양기로 바꾸어 세포를 배양하십시오.세포를 받은 후 첫 번째 전대는 1: 2 전대를 권장한다.

9.주의: 1:2 전대는 T25병 1개, T25병 2개 또는 6cm 그릇 2개를 전하는 것이다.T25병 1개가 아니라 10cm 그릇 2개.

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