인간 난소 종양 단백질 1 (OTUB1) 재조합 단백질

인란소 종양 단백질1 (OTUB1) 재조합 단백질

제품명: 난소종양단백질1 (OTUB1) 재조합 단백질

영어 이름:재조합 오투바인 1 (OTUB1)

HSPC263;OTB1;OTU1;OTU 영역, Ubiquitin 알데히드 결합 1;Deubiquitinating 효소 OTUB1;유비키틴 특정 가공 프로테아제 OTUB1

모델:CS-D009는

효소와 효소

종:Homo sapiens (Human, 사람)

출처: 원핵 표현

숙주E.coli는

내독소수준:<1.0EU/μg(LAL법 측정)

아세포 포지셔닝: 세포질

분자량 예측:32.5kDa

실제 분자량:40kDa(차이점 분석은 설명서 참조)

세그먼트 및 태그:Met1~Lys271 N 단말기 그의 태그

완충액 성분: 인산염 완충액(pH7.4，0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose 및 Proclin300 포함)

성상: 동결건조분

순도:> 97%

등전점:5.2

적용:긍정적인 통제;면역원;SDS 페이지;WB.

사양:10μg50μg200μg1mg5mg

1. 조직 단백질 추출

1) 필요한 기자재: 제빙기, 마커펜, 1.5ml EP관 2세트(고온고압처리), 큰 아이스박스 1개, 1.5ml EP관함, 장갑, 안과가위(고온고압처리), 신선조직 또는 -80℃ 냉장고조직에 보관, 4℃ 냉장고에 보관된 PBS(고온고압처리), 이액총, 흡두(고온고압처리), 연마봉 2세트(고온분해효소제), 염소제제 1종, PMX, 소시지 분해기 접착제 완충액, 이황소당알코올 (DTT), 진동기, 거품판.

a. 제빙기 제빙;

b. 마커펜은 EP관 두 세트를 마커합니다.

c.큰 아이스박스, EP 튜브박스에 얼음을 담고, 한 세트의 표시펜이 표시된 EP 튜브를 큰 아이스박스에 배치하고, 다른 한 세트의 표시펜이 표시된 EP 튜브는 EP 튜브박스에 배치하고, 장갑을 끼고, EP 튜브박스를 착용하고, 안과 커팅 콩 크기 (약 100mg) 신선한 조직 또는 -80 ℃ 냉장고 조직에 보관한다;

d. 4 ℃ 냉장고에 보관된 PBS를 꺼내고, EP관에 1ml PBS를 떨어뜨리고, 안과에서 조직을 잘라내고(동작이 빠르다), 손바닥에서 원심을 분리하고, 상청을 버리고, EP관에 1ml PBS를 떨어뜨리고, 연마봉을 연마하고, 3000에서 10분간 원심을 돌리고, 상청을 버리고, 여과지는 가능한 한 파이프에 남아 있는 액체를 빨아들이고, EP관에 남아 있는 침전물의 부피를 추산하며, 위의 단계는 가능한 한 얼음에서 조작한다;

e. 4 ℃ 냉장고에서 3 오염물 제거 분해액을 꺼내고, -20 ℃ 냉장고에서 PMSF를 꺼내 큰 아이스박스에 넣고, EP관에 침전물 3~5배 부피의 3 오염물 제거 분해액 (일반적으로 5배), PMSF (양자 비율 94: 6) 를 첨가하고, 연마봉 연마 (얼음 위 충분히 분해 20-30분) 를 첨가하며, 이상의 절차는 모두 진행해야 한다;

f.원심분리기는 예냉하여 충분히 분해된 조직액을 4 ℃, 10000에서 10분간 원심분리한다.

g. 비커를 수돗물로 깨끗이 씻어 단증수를 붓고 전기난로에서 끓인다.

h. 2 × SDS 겔 시료 완충액 (상온에 보관) 을 준비하여 -20 ℃ 냉장고에 보관된 DTT를 꺼내 큰 아이스박스에 넣고 원심 후의 상청액을 이액총으로 정량 흡입하여 다른 EP관 세트(하층 침전물을 흡입하지 않음) 에 흡입하고 상청액을 누른다: 2 × SDS: DTT = 1: 0.8: 0.2 × SDS 및 DTTTTTTTTTTTT를 첨가하여 너무 끓이지 않도록 한다.

i. 거품판을 핀셋으로 꺼내 아이스박스에 넣어 10분 정도 식힌 뒤 손바닥에서 원심을 분리한 뒤 -20 ℃ 냉장고에 넣어 보관한다.

주의: 분해액도 상황을 참작하여 단오염제거분해액 또는 세포분해액 등을 선택할수 있다.

2. 밀착 세포 단백질 추출 (세포 단백질 함량은 일반적으로 약 1x10-9mg/세포)

1) 필요한 기자재: 제빙기, 세포스크레이퍼, 마커펜, 1.5ml EP관 2세트(고온고압처리), 큰 아이스박스 2개, 장갑, 세포가 가득 찬 배양병, 4℃ 냉장고에 보관된 PBS, 3오염제거분해액, 벤조메틸황산불소(PMSF, 일종의 프로테아제 억제제, 맹독), 이액총, 흡두(고온고압처리), 시트지 완충액, 사탕기 4컵, DTX