쥐 공막 상피세포

실험 보고서:

1. 분리와 배양:

1. 무균 조건에서 1-3d령 SD 쥐의 심방 조직을 제거한 후 PBS로 이 조직 블록을 2회 세척하여 조직을 1mm3 정도 크기로 자른다;

2. 조직 블록에 4mL 효소 소화액 (0.1% 와 0.1% I형 콜라겐 효소) 을 첨가하여 10s 혼탁하여 37 ℃ 의 조건에서 10min 소화시킨 후 점적 파이프로 불어 단세포 현액을 만들어 자연적으로 침전시키고 상청을 수집하여 10% 의 FBS 배지 함유로 소화를 종료한 후 4 ℃ 에 배치한다;

3. 나머지 조직은 다시 3~4mL의 효소 소화액을 첨가하여 10s를 혼현하고 37 ℃ 를 10min 소화한 후, 상술한 방법에 따라 상청을 수집하고 소화를 중지한 후 4 ℃ 를 배치하고, 이 단계를 2-3회 반복하여 조직이 소화될 때까지 한다;

4. 200개의 스테인리스강 체망으로 세포 소화액을 여과하고, 1200r/min 원심 10min, 상청을 버리고, 침전 세포는 10% FBS DMEM/F12 배지 혼현을 함유하고, 25cm2 배지병에 접종하고, 37 ℃, 5% CO2 배지 상자에 배치하여 배지한다;

5. 차속으로 벽에 1h를 붙인 후 배양기를 흡출하여 실험 수요에 따라 6공판 중 접종하여 계속 배양한다;2. 면역형광감정:

1. 심방근세포가 80% 융합될 때까지 성장할 때 배양기를 버리고 온육한 PBS로 세포를 2회 10min씩 씻은 다음 4% 의 폴리포름알데히드로 실온조건에서 15min 세포를 고정한다.

2. PBS는 10min씩 세포를 2회 세척한 후 4 ℃ 조건에서 0.1% Triton X-100 투과막을 15min 사용한다.

3. PBS는 10min씩 세포를 2회 세척한 후 실온 조건에서 4% BSA로 세포를 30min 폐쇄한다;

4, 1: 100의 비율로 알파-actin 1항을 희석한 후 4 ℃ 냉장고에 넣어 세포를 부화시켜 밤을 보낸다;

5. PBS는 세포를 3회 씻어 매번 10min씩 1: 150의 비율로 알파-액틴에 대한 2항을 희석하고 37 ℃ 조건에서 1h를 배치한다.

6. PBS로 10min씩 3회 헹구고 거꾸로 형광현미경으로 이미지를 관찰하고 사진을 찍는다.

세포 소개:

공막은 안구벽의 외층으로서 치밀한 콜라겐과 탄력섬유로 구성되였는데 그 구조는 강인하고 불투명하다.공막의 전연은 각막연과 연결되고 후방은 시신경의 경막집과 지속된다.

공막은 외향 내에서 공막 상층부로 나뉜다.주질층;공막 하층.그 중 상층부는 상피세포로 구성되어 있다.

세포 특성:

1） 조직은 실험동물의 정상적인 눈 조직에서 유래한다.

2)세포감정: 광분각단백질(PCK)형광 염색이 양성이다.

3)감정에 의하면 세포의 순도가90%。

4)없음HIV-1은、HBV는、HCV는, 지원체, 효모 및.

5)세포 생장 방식: 상피, 불규칙 세포, 밀착 배양.

추천 배양기:

저희가 추천해드릴게요.델프원대 상피 세포 배양 체계 체외 배양의 배양기로 삼다.

주의사항:

1.세포를 받은 후 먼저 세포병이 완전한지, 배양액에 누액, 혼탁 등의 현상이 있는지 관찰하고, 상술한 현상이 발생하면 즉시 우리에게 연락하십시오.

2. 세포설명서를 자세히 읽고 세포형태, 사용배지, 혈청비례, 필요세포인자 등 세포관련 정보를 료해하여 세포배양조건이 일치하도록 확보한다. 만약 배양조건이 일치하지 않아 세포에 문제가 생기면 책임은 고객이 스스로 부담한다.

3.알코올 75%로 세포병 표면을 닦고 현미경으로 세포 상태를 관찰한다.운송 문제로 일부 세포가 온도 변화 및 격렬한 충돌로 파쇄되어 파편이 형성되는 것은 정상적인 현상이다.세포상태를 잘 관찰한후 75% 의 알콜소독병벽은 T25병을 37 ℃ 배양상자에 놓고 4~6h를 놓는다.

4.밀착 세포는 소화, 부상 세포는 직접 혼합하여 세포를 수집, 900 rpm-1000 rpm 원심 3 min, 폐기.PBS 중현세포 5mL를 더하고 900rpm-1000rpm 원심분리 3min을 추가하여 신선한 *배지로 중현세포를 배양하고 새로운 배양병이나 배양접시에 접종하여 배양함에 넣어 배양한다.

5. 고객은 동일한 조건의 배양기로 세포 배양에 사용하십시오.

6.고객이 세포를 받은 후 3일 전에 각각 몇 장의 세포 사진을 찍고, 세포 상태를 기록하여 우리 회사 기술부와 쉽게 소통하고 교류할 수 있도록 건의합니다.운송의 원인으로 인해 개별적인 민감한 세포에 불안정한 상황이 나타날수 있으므로 제때에 우리에게 련락하여 세포의 구체적인 상황을 알려주어 우리의 기술자들이 문제가 해결될 때까지 추적답방할수 있도록 해야 한다.

7.이 세포는 과학 연구에만 사용됩니다.

8. 비고: 운송용 배양기(관액배양기)는 더 이상 세포를 배양하는 데 사용할 수 없습니다. 설명서 세포배양조건에 따라 새로 조제된 *배양기로 바꾸어 세포를 배양하십시오.세포를 받은 후 차전대 권장 1: 2 전대.

9.주의: 1:2 전대는 T25병 1개, T25병 2개 또는 6cm 그릇 2개를 전하는 것이다.T25병 1개가 아니라 10cm 그릇 2개.

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