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상해 가정구 가로도로 1661호 24동
상해백과생물기술유한공사
개요
보조효소Ⅰ NAD(H) 함량 테스트 박스 가시 분광 광도법 관련 제품: 6 인산 포도당 탈수소 효소(G6PDH) / 포도당 6 인산 탈수소 효소 테스트 박스 6 인산 글루코올 탈수소 효소(G6PDH) / 포도당 6 인산 탈수소 효소 테스트 박스 미량법 6 인산 포도당 탈수소 효소(G6PDH) / 포도당 탈수소 효소 트립토판 이소레몬산 탈수소효소(ICDHc) 테스트 박스 미량법
제품 정보
특별히 주의를 환기시킨다: 본 제품은 과학연구연구에만 사용되며 인체림상에서 직접 검사하는데 사용되여서는 안된다.
제품명:보조효소Ⅰ NAD(H) 함량 테스트 박스 가시 분광 광도법
제품 사양: 50 튜브/24
검출 방법: 가시 분광 광도법
상품번호: BK-01S6322
제품 분류:
상품 소개:
| 의의를 측정하다 동물, 식물, 미생물 및 배양 세포에 널리 존재하는 보조효소 Ⅰ NAD (H) 는 당효소 (EMP) 와 트리카르복실산 순환 (TCA) 의 주요 수소 수용체이며, 생성 된 NADH는 호흡 전자 사슬 (ETC) 을 통해 전자를 산소에 전달하고 ATP를 합성하면서 큰 양의 ROS를 형성하며 NADH는 NAD +로 재생됩니다.설탕, 지방, 단백질의 3대 대사물질 분해 중 산화반응의 절대다수가 이 체계를 통해 이루어진다.NAD(H) 함량과 NADH/NAD+ 비율의 높낮이는 당효해와 TCA 순환의 강약을 평가하는 데 사용할 수 있다.높은 NAD(H) 및 NADH/NAD+ 비율은 세포의 호흡 산소 소비량이 높고 과산화 상태라는 것을 의미한다.또한 NADH/NAD+ 비율이 높아지면 당효해와 TCA 순환도 억제할 수 있다.또 NAD+ 분해 산물은 세포 신호 전도, 대사, 유전자 발현 등에 중요한 조절 작용을 한다. 측정 원리 각각 산성과 알칼리성 추출액으로 시료 중 NAD +와 NADH를 추출하고, NADH는 PMS의 수소 전달 작용을 통해 산화형 티아졸람(MTT)을 갑으로 환원해 570nm에서 흡광값을 측정한다.NAD + 는 에탄올 탈수소 효소에 의해 NADH로 환원될 수 있으며, 더 나아가 MTT 환원법으로 검사된다. 자체 의 기기 와 용품 이 필요 하다 가시분광광도계, 탁상원심분리기, 이액기, 1mL 유리비색그릇, 연구발, 얼음과 증류수. |
필요한 장비 및 장비:
가시분광광도계, 1mL 유리비색그릇(광경 1cm), 저온원심분리기, 이액기, 연발, 얼음과 증류수
4. 초산화물 분해효소 (SOD) 의 측정:
정식 실험 전에 2개의 샘플을 선택하여 예측 결정을 하고, 본 샘플의 상황을 이해하고, 실험 절차를 숙지하며, 실험을 피할 것을 건의한다
샘플과 시약 낭비!
1. 견본 제조
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① 조직 샘플: 약 0.1g의 조직 (수분이 충분한 샘플은 0.25g을 취할 수 있음) 을 취하고 1mL의 추출액을 첨가하여 4ºC 또는 얼음욕에서 진행 균일한 풀.4ºC × 12000rpm 원심 10min, 청을 취하여 측정 대기액으로 한다. 【주】: 샘플량을 증가하면 조직질량(g):추출액 부피(mL)가 1:5~10의 비율로 추출 가능 |
② 세균/세포 샘플: 먼저 세균이나 세포를 원심관 안으로 수집하여 원심을 분리한 후 상청을 버린다.약 500 만 박테리아 또는 세포를 취하여 1 mL를 첨가 추출액, 초음파 파쇄 세균 또는 세포 (빙욕, 출력 200W, 초음파 3s, 간격 10s, 30회 반복); 12000rpm 4 ℃ 원심분리 10min, 깨끗이 취하고 얼음에 놓고 측정을 기다린다. 【주】: 샘플량을 증가하면 세균/세포 수량(10 4): 추출액(mL)을 500~1000:1의 비율로 추출한다.③ 액체 샘플: 직접 검사;만약 혼탁하다면, 원심을 분리한 후 청을 취하여 검사한다. |
실험 방법학:
1. 간소의 조제:
시판 간소동건분 140단위/mg, 1그램의 병포장, 1병당 140000단위, 0.1그램의 간소동건분을 취하고 생리염수 5ml를 첨가하여 2800단위/ml로 배합한다. 50~100μl의 습윤관벽을 취하면 인혈이 3~5ml로 응고되지 않고 혈액이 응고되지 않는다.쥐의 피는 쉽게 응고되기 때문에 좀 더 진하게 하는 것이 좋다.간소동건분 0.1그램을 취하고 생리식염수 3ml를 첨가하여 용해한 후 50~100μl를 취하면 쥐피 2~4ml에 저항할 수 있다.
간소항응고관의 제조: 간소동건분 0.1그램을 취하고 생리식염수 2.5ml를 첨가한다.100μl~150μl를 취하여 플라스틱이나 유리관에 떨어뜨리고 관벽을 습윤하며 80 ℃ 보다 낮은 작은 오븐 (빵을 구울 수 있는 작은 오븐) 에서 가로로 돌려 5~10분 간격으로 돌려 건조할 때까지 4 ℃ 에 넣어 보관하면 2~5ml 의 혈액이 응고되지 않는다.
2. 혈액 샘플의 수집:
전혈은 수집한 조건에 따라 불항응고와 항응고 두 종류로 나뉜다.동시에 응고에 저항하지 않고 분리된 상층의 노란색 액체를 우리는 혈청이라고 부른다;항응고에서 분리된 상층의 노란색 액체를 우리는 혈장이라고 부른다.
1. 응고에 저항하지 않고 혈청을 수집한다: 수집한 전혈을 1~2시간 동안 정치하고, 직접 저속 원심분리 출혈청을 대기 또는 보존한다.
2. 항응고 수집 혈장: 항응고 전혈을 수집하고, 충분히 항응고를 가볍게 전도한 후, 직접 저속 원심분리 혈장 (또는 30분 정도 정치한 후 다시 저속 원심분리 혈장) 을 사용하거나 보존할 수 있다.서로 다른 항응고제의 성능 특징에 따라 적합한 항응고제를 선택한다.실험실에서 흔히 사용하는 항응고제에는 간소의 각종 소금, EDTA 및
응고 방지 고려 사항 선택:
①, 각 샘플에 첨가된 항응고제의 양은 일치해야 하며, 동시에 채취한 전혈의 양도 가능한 한 일치해야 한다;
②, 항응고 전혈을 수집한 후 반드시 가볍게 전도하여 충분히 항응고하여 일부 혈액이 항응고제에 접촉하지 않아 응고하는 것을 방지한다;
③, 항응고전혈로 수집한 혈장이 상대적으로 많다(1ml의 항응고전혈은 0.4~0.5ml의 혈장을 분리할 수 있다).
④ 항응고로 수집한 혈장을 냉동 보관한 후 해동 시 솜 모양의 혼탁이 나타날 수 있으며, 있을 경우 원심에서 혼탁을 제거한 후
측정에 사용하다.
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주의사항:
1. 시약 2는 효소로 냉동할 수 없으며, 사용 시 얼음 위에 놓는다.
2. 보살핌에 대해 관리만 하면 된다.
3. 관리용 흡광치가 2보다 크면 시약 2용 증류수를 7배 희석한 후 사용하는 것이 좋다(10μl 시약 2원액 + 60μl 증류수).
4. SOD는 무엇때문에 어떤 견본의 측정관이 대조관보다 크며 대조관수치는 어느 범위에 있는가?
돌봄의 범위는 0.8-2이다.돌봄에 대한 흡광치가 너무 낮은 것은 (1) 시약 2 또는 시약 4에 현재 배합하지 않은 것일 수 있다;(2) 시약을 순서대로 첨가하지 않은 경우;(3) 반응시간이 부족하여 반응시간을 연장할수 있다 (반응시간 30min은 40min까지 연장할수 있다.)돌봄에 대한 흡광치가 너무 높은 것은 시약 2가 조작설명서에 따라 상응하는 배수를 희석하지 않은 것일 수 있다.
만약 측정관이 대조관보다 크면 견본중의 불순물의 영향이 너무 클수 있으며 불순물의 영향을 낮추기 위하여 일반적으로 견본을 맑은 액체로 추출하여 증류수 또는 추출액을 10배 희석한후 재측정하면 일반적으로 측정을 정상적으로 할수 있다.공식에 상응하는 희석 배수를 곱하여 계산하다.
