농간균 전기 감지 상태 세포 복제 및 표현 분석

EHA105 (pSoup) 전기 능력 세포

농간균 전기 감지 상태 세포

제품 태그:

EHA105 균주;농간균 감수성 세포;Rifampicin (Rif) 리푸핑;Kanamycin (kan) 카나메소;EHA101；LBA4404；GV3101；AGL1；식물 유전자 변형 연구;

제품 주문:더 큰 포장 또는 제품 기술 문제

제품 설명:

EHA105 균주는 EHA101 균주를 개조한 것이다. 염색체 배경은 C58이다. 핵 유전자는 선별 라벨인 리푸 평항성 유전자 rif를 함유하고 있다. 전환 조작을 용이하게 하기 위해 이 균주는 자체 이송 기능이 없는 호박 알칼리형 Ti 입자 pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) 를 가지고 있다. 이 입자는 vir 유전자 (vir 유전자는 T-DNA가 식물 유전자 유전자 그룹에 삽입되어 DNA 기능이 원활하게 전이되는 데 필요한 T-HAp DNA 기능이 있다.EHA105 균주에서 help 입자로 전입: pSoup, 즉 획득: EHA105 (pSoup) 균주, pGreen, 62SK, pGs2 시리즈 입자가 농간균에서 복제되는 것을 도울 수 있으며, 동시에 이 균주에 테트라사이클린 (tetR) 저항성을 부여하여 벼, 담배 등 식물의 유전자 변형 조작에 적용된다.

우리 회사 (무강생물) 가 제공하는 EHA105 (pSoup) 전기전환감수성세포는 특수공법으로 제작되였는데 특히 대질립자의 전환에 적합하다.유전자형은 C58(rifR) Ti pEHA105(pSoup)(pTiBo542DT-DNA) Succinamopine(pSoup-tetR)이며, pGs2 입자 검사를 통해 전환 효율은 >105cfu/μg DNA이다.

제품 그룹:

저장 및 운송 조건:

보존: -80 ℃ 보존, 1 년 유효.

운송: 드라이아이스 운송.

주의사항

1) 감수성 세포는 -80 ℃ 에 보존해야 하며, 감수성 세포의 전환 효율을 떨어뜨리지 않도록 반복적으로 얼리고 방치하는 시간이 너무 길어서는 안 된다.

2) 전체 전환 작업은 상응하는 온도 및 무균 조건의 요구에 따라 엄격히 진행한다.

3) 입자를 넣는 부피는 감각적 부피의 1/10보다 크면 안 된다.입자가 불순하거나 에탄올 등 유기물 오염이 존재하면 전환 효율이 급격히 떨어질 수 있다.입자가 두 배로 증가하고 전환 효율이 한 단계 떨어진다.

4) zui의 높은 전환 효율을 확보하기 위해 전체 조작 과정은 가볍고 부드러우며 저온을 유지해야 한다.

5) 고농도의 입자를 전환하면 최종 도판 사용량을 상응하게 줄일 수 있다.

6) 평판에 클론 밀도가 너무 높으면 영양 부족으로 클론의 성장이 느려지고 균락이 작아진다.큰 균락을 얻기 위해서는 입자 용량을 줄여야 한다.

7) 배지에 리푸핑을 첨가하는 목적은 잡균의 생장을 방지하고 농간균을 선별하는 것이다.사용된 균주 저항성에 따라 체인 mei소나 경대 mei소를 첨가하면 Ti 입자가 분실되는 것을 방지할 수 있지만, 체인 mei소는 농간균의 유전자 변형 조작에 불리하며, 일반적으로 농간균을 배양할 때 체인 mei소나 경대 mei소를 고려하지 않는다. Ti 입자가 분실될 확률이 매우 낮기 때문이다 (기본적으로 무시할 수 있다)

8) 당신의 안전과 건강을 위해 실험복을 입고 일회용 장갑을 끼고 조작하십시오.

사용 방법

1) 0.1cm 전기충격컵과 컵 뚜껑을 저장액에서 꺼내 깨끗한 흡수지에 5min 거꾸로 놓고 물기를 빼서 에탄올이 충분히 휘발되도록 5min 정돈하고 즉시 얼음에 삽입하여 얼음면을 단단히 다지며 전극컵 꼭대기는 얼음면에서 0.5cm 떨어져 컵 뚜껑을 쉽게 덮고 얼음에는 5min 정돈하여 충분히 온도를 낮춘다.

2) -80 ℃ 로 보존된 감수성 세포를 얼음에 5min 삽입하여 녹일 때까지 기다린다.

3) 50μl 감수성 세포현액에 0.01~1μg(부피 6μl 미만) 입자 DNA를 넣고 손보로 관 밑을 두드려 골고루 섞이게 한 후 즉시 얼음에 삽입한다.총으로 감수성 세포-입자를 가볍게 불어 섞은 후 빠르게 전기 충격컵으로 전이하고, 컵 뚜껑을 덮고, 공관은 보류하여 사용할 예정이다[주의: 감수성 전환 효율이 비교적 높기 때문에, di는 한 번에 zuihao를 사용하여 사전 시험을 하여 zuijia의 입자 사용량을 확정한다].

4) 전기 회전기를 가동하고, 매개변수를 설정한다: C=25 μF, PC=200 ohm, V=2400 V (이 매개변수는 Bio-rad를 참고하고, 구체적으로 사용하려면 전기 회전기 추천 절차를 참고하여 조작한다), 전기 충격컵을 전기 회전조에 빠르게 넣고, 전기 충격은 얼음에 빠르게 삽입한다.

5) 무항생제 700μl의 LB를 첨가하고 감수성 공관으로 옮겨 28℃에서 2~3h 진동배양한다.

6)6000rpm 원심분리 1min, 약 100ul 상청을 남기고 총으로 중현균체를 가볍게 불어준다.이후 해당 항생제를 함유한 LB나 YEB 태블릿에 덧대어 무균 볼트 막대로 세포를 가볍게 펴 바른다.실온은 10min 정치하고 액체가 흡수되면 평판을 거꾸로 놓고 28 ℃ 에서 2~3일 배양한다."주의: 태블릿에 전환에 사용되는 이중 캐리어 항생제만 함유되어 있을 때, 28 ℃ 에서 48h를 배양하면 된다;평판에 이원 캐리어 항생제를 첨가하는 동시에 10μg/ml의 리푸를 첨가하면 28 ℃ 에서 48-60h를 배양해야 한다. 평판에 이원 캐리어 항생제를 첨가하는 동시에 20μg/ml의 리푸를 첨가하면 28 ℃ 에서 60-72h를 배양해야 한다. 20μg/ml 이상의 리푸를 평판이나 액체 배양에 사용하는 것은 권장하지 않는다.

7) 목적 클론의 액체 배양:

j소량요균: 15ml의 원저통기시험관에 대응항생제를 함유한 LB액체배지 1ml를 첨가하고 신선하게 배양된 평판에서 1~2개의 단균락을 골라 접종한다. 30 ℃, 200rpm 요균 24-48h.

k 대량 요균: 100ml 통기 삼각병에 대응 항생제를 함유한 LB 액체 배지 20ml 미만을 첨가하고, 작은 요균액을 취하여 2% 비율로 접균, 30 ℃, 200rpm 요균 24-48h.

"주의": 농간균 (호산소균) 에 대해 말하면 고체평판이든 액체요균이든 모두 대량의 산소가 수요된다.액체요균의 성공의 관건은 바로 배지에 충분한 용해산소가 함유되여있음을 보장하는것으로서 다음과 같은 방법으로 통제할수 있다. j는 통기시험관 또는 삼각병을 사용한다.k 영양액의 큰 횡단면과 작은 두께를 확보한다.l 항생제는 가급적 적게 넣거나 넣지 않고, 반드시 첨가해야 하는 항생제는 가급적 저농도를 사용한다.

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부표 1 고체 및 액체 LB 배양기 설계도

부표 2 고체 및 액체 YEB 배양기 설계도

부표 3 흔히 볼 수 있는 농간균의 항생제 민감성 총표

- Written/Edited by V. Shallan [저작권은 MKBio 무강 소유]

상해강생물과학기술유한회사는 생명과학과 생물기술분야의 연구에 발을 들여놓은 시약, 계기와 실험실의 소모품과 실험봉사사업으로서 주로 세포생물학, 식물학, 분자생물학, 면역학, 생물화학, 단백질조학에 종사한다.바이오제약과 진단시약 연구개발 생산 등 분야.본사는'사람을 근본으로 하고 성실을 신용으로 하며 계약은 신용을 지킨다'는 경영 이념을 계승한다.'품질 보장'의 원칙을 견지하여 많은 고객에게 양질의 제품을 제공하다.