AFDye 555 NHS ester 세포 염색

AFDye 555 NHS 에스테르

(알렉사 플루어 555 NHS 에스테르 동등)

제품 정보

제품 설명

AFDye 555는 광양자 생산량이 매우 높은 수용성, 강한 빛 안정성의 염료이다.AFDye 555는 주황색 형광을 발산하는 염료로 488nm 또는 532nm 레이저 스펙트럼 선을 사용하여 자극할 수 있다.Cy3 또는 테트라메틸로타민의 대체품으로 살아있는 세포와 고정된 세포에서 빛의 안정성이 Cy3보다 우수하다.pH 4-10 범위 내에서 내구성이 강하다.

AFDye555 NHS ester (Equivalent toAlexa Fluor 555 NHS ester) 는 아민 반응, 주황색 형광을 발산하는 염료로, 보통 아민을 통해 단백질이나 항체, 폴리펩타이드, 아민기로 장식된 과뉴클레오티드, 기타 아민을 함유한 생물 분자를 표시한다.이 마커는 일반적으로 pH 7-9 범위에서 zui에서 유효하며 안정적이고 공가 아미드 키를 형성합니다.

제품 특성

저장 및 운송 방법

보관: -20ºC 피광 건조 보관, 2년 유효.

운송: 아이스팩 운송.

주의사항

1) 형광 염료는 모두 담금질 문제가 존재하므로 빛을 피하여 형광 담금질을 늦추도록 주의하십시오.

2) AFDye NHS ester 계열 염료는 일정한 수용성이 있지만, DMSO, DMF를 용해하여 모액을 조제하고 후속 표기 실험을 진행하는 것을 강력히 추천한다.수용성 체계에서 이러한 반응성 기단은 수해에 의해 비반응성 유리산 형태로 생성되기 매우 쉽기 때문이다.

3) 귀하의 안전과 건강을 위해 실험복을 입고 일회용 장갑을 끼고 조작하십시오.

1. 염색단계 (면역글로불린IgG의 표기를 례로 들면)

거의 모든 단백질이나 폴리펩타이드는 아민 반응 시약 (탐침) 으로 표시할 수 있다.다음은 IgG 항체에 최적화된 표시 단계로, 사용자는 자신의 단백질량에 따라 반응 체계를 확대하거나 축소할 수 있지만, 이상적인 염색 결과를 얻기 위해서는 단백질 농도가 2mg/ml 미만이어서는 안 된다.서로 다른 단백질 (폴리펩티드) 에 함유된 아민기 수, 아민기 표면 위치가 모두 큰 차이가 있기 때문에, 사용자는 첫 실험에서 세 그룹의 서로 다른 아민 반응 시약: 단백질의 몰비를 만들어 zuijia 표기 효율에 도달할 수 있는 몰비를 선별할 것을 건의한다.

1.1 0.1M 카본 수안 수소 나트륨 완충액 1ml에서 단백질 ~10mg을 충분히 용해한다.

주①: 단백질 농도는 보통 5-20mg/ml로 짝짓기 성공률은 단백질 농도에 높은 의존성을 가지고 있다.농도가 2mg/ml 미만이면 표시 효율에 심각한 영향을 줄 수 있습니다.

주②: 표기체계는 Tris, glycine, 암모늄염, 또는 BSA와 같은 기타 안정단백질을 함유한 아미노기저물질을 피해야 한다. 표기할 단백질용액에 상기 물질이 함유된 오염은 10-20 mM의 인산염완충액 (PBS) 에 투석한 다음 ml당 0.1 ml 1M 탄산수소염완충액 (pH 8.3-9.0p) 에 필요한 값을 첨가해야 한다.

주③: 항체 용액에 존재하는 저농도 중첩질소나트륨(<3mM) 또는 황수은사(<1mM)는 표시 반응을 방해하지 않는다.

1.2 고품질 무수 DMF 또는 DMSO 용해 아민 반응 시약 (프로브) (예: AFDye555 NHS ester) 에서 10 mg/ml.

참고 ①: AFDye 488 NHS ester의 수용액은 반드시 현금으로 배합해야 하며, 보존할 수 없다. 왜냐하면 수용액에 있으면 물에 의해 비활성 유리산으로 분해되기 때문이다.AFDye 488 NHS ester의 DMSO 저장액은 ≤-20 ℃에 보관할 수 있으며 2 주 이내에 사용할 것을 권장합니다.

1.3 소용돌이 단백질 용액을 섞거나 50-100µl 아민 반응 시약(프로브)을 천천히 넣는다.

주 ①: 아민 반응 시약(탐침)을 첨가한 양은 0.5-1mg으로 전체적으로 약 1/4-1/3의 아민 반응 시약이 단백질에 우연히 연결된다.서로 다른 단백질과 표기 시약의 표기 효과가 다르므로 구체적인 상황에 따라 양자 비율을 최적화하십시오.

1.4 실온에서 천천히 휘저어 빛을 피하여 1h (또는 그 이상) 부화시킨다.

1.5 【선택 사항】 0.1ml의 신선한 조제 1.5M 히드록시아민(pH 8.5)을 첨가하여 반응을 중지하고 실온에서 히드록시아민 함유 체계를 1h 부화시킨다.

1.6 순화: 적합한 방법 (예: 투석법, P-30 기둥 또는 PD-10 기둥) 을 선택하여 표시 산물을 순화시키고 소금 이온이나 반응하지 않는 아민 반응 시약을 제거한다.

1.7 저장: 표시된 단백질은 빛을 피하여 2-8 ℃ 에 보관한다.순화된 단백질 우연물 농도가 <1mg/ml이면 BSA 또는 기타 안정단백질 1-10mg/ml를 첨가한다.2mM 첩질소나트륨이 존재하는 경우 2-8 ℃ 는 몇 달 동안 보관할 수 있다.만약 더 오래 보존해야 한다면, 분장 후 -20 ℃ 에서 빛을 피하여 보존해야 하며, 반복적으로 얼지 않도록 해야 한다.

2. 태그 축척 계산(F/P 값)

면역글로불린 IgG 등 대부분의 항체에는 무어의 흡광계수가 203000이고 F/P 수치가 4~9 사이가 가장 적합하다.
2.1AFDye555 마커 단백질 F/P 값 계산:
1) PBS 정밀배수로 정량의 약간의 순화된 우연단백질을 희석하여 1cm 비색그릇에서 280nm와 555nm의 광흡수를 측정한다.
2) 시료의 단백질 농도 계산: 단백질무어 농도 = (A280-(A555×0.08))×희석배수/203000
3) 표기 비율 계산: 무어 단백질 결합당 염료 무어 수 = A555 × 희석 배수 / (15000 × 단백질 무어 농도)

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- Written/Edited by V. Shallan [저작권은 MKBio 무강 소유]

상해강생물과학기술유한회사는 생명과학과 생물기술분야의 연구에 발을 들여놓은 시약, 계기와 실험실의 소모품과 실험봉사사업으로서 주로 세포생물학, 식물학, 분자생물학, 면역학, 생물화학, 단백질조학에 종사한다.바이오제약과 진단시약 연구개발 생산 등 분야.본사는'사람을 근본으로 하고 성실을 신용으로 하며 계약은 신용을 지킨다'는 경영 이념을 계승한다.'품질 보장'의 원칙을 견지하여 많은 고객에게 양질의 제품을 제공하다.