3T3-L1(생쥐 배아 섬유세포)

세포 보존 방법:

(1) 세포동존

1.10% DMSO 또는 글리세린, 10~20% 송아지 혈청을 함유한 동존배양액을 조제한다;

2. 생장기에 맞는 세포를 채취해 오래된 배양액을 제거하고 PBS로 세척한다.

3. PBS를 제거하고 적당량(배양접시 표면 덮기)을 넣어 단층으로 자란 세포를 소화시킨다.

4. 원심분리 1000rpm, 5min;

5. 제거하고 적당량의 배합된 동존배양액을 첨가하여 빨대로 가볍게 불어 세포를 균일하게 하고 계수하여 동존액중의 세포의 최종밀도를 5×106/ml~1×107/ml로 조절한다.

6. 동존관에 세포를 분리하여 넣고 튜브당 1~1.5ml;

7. 동존관에 세포의 명칭, 동존시간 및 조작자를 표시한다.

8.냉동 저장: 표준 냉동 저장 프로그램은 냉각 속도 -1~-2 ℃/min;온도가 -25 ℃ 이하일 경우 -5 ℃ ~ -10 ℃ /min으로 증가할 수 있습니다.-100 ℃ 가 되면 액체 질소에 빠르게 침투할 수 있다.또한 세포가 담긴 냉동관을 -20 ℃ 냉장고 2h에 넣은 다음 -70 ℃ 냉장고에 넣어 밤을 보내고 냉동관을 꺼내 액체질소 용기에 옮길 수 있다.

제품 정보:

상품 소개:

작업 단계:

1) 냉동 전 24-48시간 동안 반량 또는 전량 배양기를 교체하여 세포를 지수 성장기에 두어야 한다.

2), 냉동보존용액 조제 (사용 전 조제): 원심관 하나를 따로 취하여 배양기, 혈청을 첨가하고 디메틸아술폰 (DMSO) 을 20% 농도로 한 방울씩 첨가하면 2배의 냉동보관액을 만들어 실온에서 사용할 수 있다.

3)、원심에서 배양된 세포를 수집하여 혈청을 첨가한 배양기로 세포를 다시 일으켜 소량의 세포부유액 (약 0.1ml) 세포 농도 및 동전 생존율을 계수한다.

4), 세포현액과 같은 양의 동존액을 취하여 천천히 한 방울씩 세포현액을 첨가하고 시험관을 흔들어 세포동존현액 (DMSO 후 농도는 5~10%) 을 만들어 세포농도를 1~5×106cells/ml로 균일하게 혼합하여 이미 표시된 냉동보존관에 나누어 1~2ml/vial로 만들고 소량의 세포현탁액을 취하여 오염을 검사한다.엄밀히 봉인한후 세포명칭, 대수, 날짜를 명기하여야 한다.그런 다음 동결 보관합니다.

주의사항:

1) 냉동보존하려는 세포는 성장이 양호하고 생존율이 높은 상태로 약 80~90% 의 치밀도를 가져야 한다.냉동 전에 세포가 여전히 그 성질을 가지고 있는지 검사하고, 냉동 보존 1~2일 전에 항체 생성 여부를 테스트해야 한다.

2), 세포는 액체 질소 중에서 장기간 동존할 수 있으며 세포의 활력에 영향을 주지 않는다;-70도에서 몇 달 동안 저장할 수 있습니다.

3)、냉동보호제의 품질에 주의한다.DMSO는 시약 등급이어야 하며, 무균 및 무색 (0.22micron FGLP Telflon은 Sigma D-2650과 같은 무균 제품을 필터링하거나 직접 구입하여 5~10ml의 작은 부피로 나누어 장착하고 4 ℃ 의 빛을 피하여 보관하며 여러 번 해동하지 마십시오.Glycerol은 또한 고압 증기로 멸균 한 후 빛을 피하여 보존하기 위해 시약 등급이어야합니다.오픈 후 1 년 이내에 사용됩니다. 장기 저장 후 세포에 독성이 있기 때문입니다.이 방법에서는 DMSO가 직접 첨가될 때 방출되는 열로 인한 세포 손상을 피할 수 있도록 두 배의 동결 보존액을 먼저 제조한다.세포 현액을 천천히 한 방울 한 방울 첨가하는 것은 세포가 점차 고침투에 적응하게 하여 세포의 손상을 줄일 수 있다.DMSO는 일부 백혈병 세포주의 분화를 일으킬 수 있으며 10% 글리세린으로 동존할 수 있다.

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